產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4086 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
超級細菌PCR檢測試劑盒說明書 | New DelhiMetallo1(NDM1)PCR | BKP4086 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:超級細菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
NCI-H2452(人間皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2球蛋白抗原雞IgGshēng huà shì jì容量:RT50片/盒
CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸結轉移癌細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠Lewis瘤株;LLT2,5-二肖基本酚(加約20%水濕潤,本品干重約為5g) 2,5-PHqNOL 39-71-2
斑馬魚尾鰭細胞;AB.92-羥基-4-甲氧基,英文名或英文縮寫:4-metxoxysalicylaldehyde,級別:BR,規(guī)格:50克
IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎳片shēng huà shì jì容量:RT10克
Hep 3B 人細胞103-81-12-本乙酰胺2-pxenylacetamide
CD3D Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3d / CD3 delta 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸棗仁皂苷D(標準品)Jujuboside D質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠管內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL偽原薯蕷皂苷Pseduoprotodioscin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
HCC-LM3人細胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標準品)Oxypaeoniflorin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
LRIG1 Protein Mouse 重組小鼠 LRIG1 / LIG-1 蛋白 (His 標簽)3-異倒捻子素3-isomangostin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
SW1116(人腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小腸隱窩上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)柚皮苷二氫查爾酮Naringin dihydrochalcone質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
超級細菌PCR檢測試劑盒說明書EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) D-叔亮氨酸鹽酸鹽D-tert-Leucine hydrochloride質量規(guī)格:BR,98.5%
人卵巢;PA-1DTAC;十二烷基三甲基氯化銨Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)質量規(guī)格:>99%,BR
貓腎細胞;F81 EB病毒轉化的B細胞,CGM1細胞 CCC-SMC-2細胞,兔主動脈平滑肌細胞CTAC;十六烷基三甲基氯化銨CTAC質量規(guī)格:>99%
人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92MI [NK92MI]十八烷基三甲基氯化銨Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)質量規(guī)格:>99%,BR
CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細胞裂解液 (陽性對照) 十烷基三甲基氯化銨Decyltrimethylammonium chloride質量規(guī)格:>99%
人胚肺二倍體細胞;KMB-17wo7iumFORMATE酸鈉*白色粉末RTsigma
HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 燦爛綠;亮綠;減性亮綠;鹽沙綠 Brillicnt grqqn;DicMond grqqn G;qMqrcld grqqn crystcl;Mclcchitq grqqn G;C.I. 42040 633-03-4
CL-0306SMC-1(人胸膜瘤細胞)5×106cells/瓶×2二青 FF Xylene Cyanol FF (for molecular biolog... 2650-17-1 1G 染色劑
A673細胞,橫紋肌癌細胞 人巨核細胞保細胞,Dami細胞 人惡性多發(fā)性;ERA-2D--TagatoseD-塔格糖250毫克BR,牡蠣提取
293T(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2L-Mine 25g/100g/250g/Sigma5g 國產
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。