產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4066 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
滑液支原體PCR檢測試劑盒說明書 | Mycoplasma synoviaePCR | BKP4066 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:滑液支原體PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
NHEM.f-c 正常人表皮素細胞(NHEM)少年者 500,000cells 視網(wǎng)膜muller細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)metxyllinolenate順-9,12,15-十八碳三1酸500克AR,45%
膠原I-3D凝膠試劑盒C3DGKβ- β-Alanine,99% 107-95-9 500G 通用試劑
F11R Others Rat 大鼠 JAM-A / F11R 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙環(huán)務烷六拂鱗醋鐵 FqRROCqNIUM HqXcFLUOROPHOSPHcTq 11077-4-0
人視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL頭孢菌素Ⅳ,英文名或英文縮寫:Cephalexin monohydrate,級別:BR,500u/mg,規(guī)格:1毫克
FAT細胞,大鼠細胞 SHZ-88(大鼠癌細胞) 大額牛肺細胞;BFR-L17758-97-6酸 Lead chromate
CL-0149MCF-7(人癌細胞)5×106cells/瓶×2蔗糖1酸化酶Sucrose phosphorylase from L. Mesenteroides質量規(guī)格:BC Grade
NIH/3T3細胞,鼠成纖維細胞系 人Butts瘤細胞系,CA46細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1磺胺二甲嘧啶鈉(>99%,BP)Sulfamethazine salt質量規(guī)格:>99%,BP
Anglne(人細胞) 5×106cells/瓶×2磺溴酞鈉(>98%,BR)Sulfobromophthalein di salt hydrate質量規(guī)格:>98%,BR
CXCL12 Others Human 人 CXCL12 / SDF1b 人細胞裂解液 (陽性對照) Sulfo-MBSSulfo-MBS質量規(guī)格:BR
豬腎傳代細胞;IBRS-2四庚基溴化銨(>98%,BC)Tetraheptylammonium bromide質量規(guī)格:>98%,BC
滑液支原體PCR檢測試劑盒說明書CM-H021人平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mL氘代DMSO-D6(0.5ml x 10)Dimethyl Sulfoxide-D6質量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%
Lncap細胞,細胞 膀胱變移細胞癌細胞,T-24細胞 人胚腎細胞;293 Cells, low passage氘代DMSO-D6(0.5ml x 10)Dimethyl Sulfoxide-D6質量規(guī)格:D,99.9%
615小鼠株;Ca763氘代DMSO-D6(0.6ml x 10 )Dimethyl Sulfoxide-D6質量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%
TIGIT Others Human 人 TIGIT / VSTM3 人細胞裂解液 (陽性對照) 氘代DMSO-D6(0.6ml x 10 )Dimethyl Sulfoxide-D6質量規(guī)格:D,99.9%
人類成纖維細胞系;CNLMG-B5537SKIN氘代DMSO-D6(10 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%
人癌細胞;MDA-MB-453牛白蛋白,英文名或英文縮寫:BSA,級別:精制級,350-600u/mg,芬末,規(guī)格:25克
NCI-H661細胞,大細胞細胞 人細胞,HONE1細胞 CL-0301M-NFS-60 (小鼠細胞G-CSF依賴性)5×106cells/瓶×23,4-三拂本硼醋 3,4,5-Trifluorophqnylboronic ccid 143418-49-9
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1SSCBUFFER,20X,WITH1%SARCOSYL SSC,含 1% 十二烷基肌酸鈉超級透明無色液體RTsigma
PDCD1 Others Mouse 小鼠 PD1 / PDCD1 人細胞裂解液 (陽性對照) 激動素,英文名或英文縮寫:6-KT,級別:USP級,95%,規(guī)格:1克
膀胱平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)21645-51-2氫氧化鋁AluMiniuM xy7noxide;Hydrated aluMina;AluMinuM trihydrate