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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

FLT1 Others Human 人 FLT1 / VEGFR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1-奈酚100毫克

CCD-18Co 正常人組織細(xì)胞沉香油醇 Linalool,97% 78-70-6 25ML 通用試劑

CL-0062CHO-K1(倉鼠卵巢細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2乳糖 Lcctosq stcndcrd 10039-6-6

NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系微量可調(diào)移液器P2.51克

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(傣族);KM9405 人大隱平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL7440-5-3PalladiuM
HEL(人紅白細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2炔雌醇17-β-D-葡萄糖苷酸Ethynyl Estradiol 17-β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進口

hMSC-UC-c 從臍帶基質(zhì)提取的的人類間質(zhì)干細(xì)胞(hMSC-UC) 500,000cells 大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞RM炔雌醇3-醋酸鹽Ethynyl Estradiol 3-Acetate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠骨髓細(xì)胞;FDC-P1β-雌二醇 3-(β-D-葡萄糖苷酸)鈉鹽β-Estradiol 3-(β-D-glucuronide)  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口

MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / MER 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-羥基炔雌醇2-Hydroxy Ethynyl Estradiol質(zhì)量規(guī)格：美國進口

MDA-MB-415 人腺癌細(xì)胞4-羥基炔雌醇4-Hydroxy Ethynyl Estradiol質(zhì)量規(guī)格：美國進口
曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒說明書大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1亥茅酚苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Sec-O-Glucosylhamaudol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品

RK1 Others Human 人 kA / RK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-谷氨酸D-Glutamic acid質(zhì)量規(guī)格：0.98

平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCMTLCK(進分)Nα-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone HCl質(zhì)量規(guī)格：進分,sigma T7254

AMBP Others Human 人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甘氨酰-L-酪氨酸；甘洛二肽Glycyl-L-tyrosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,水合物

人肝細(xì)胞;QSG-7701 [QSG7701]D-亮氨酸D-Leucine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4B 小鼠L6565克隆細(xì)胞系，L6565細(xì)胞 RTG細(xì)胞，鮭魚胚胎細(xì)胞西立伐他汀內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：美國進口Cerivastatin Lactone

人胚胎肌肉組織來源細(xì)胞;CCC-HSM-2去甲基西立伐他汀鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Desmethyl Cerivastatin,  Salt

PVR Others Rat 大鼠 PVR / CD155 / NECL5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥基西立伐他汀鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Hydroxy Cerivastatin  Salt

視網(wǎng)膜muller細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)去甲基羥基西立伐他汀鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Desmethyl Hydroxy Cerivastatin  Salt

CD96 Others Human 人 CD96 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 氨芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量測定Amfenac
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。