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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BKP3946 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
伊氏李斯特菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書 | Listeria ivanoviiPCR | BKP3946 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：伊氏李斯特菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S1桔汁瓊脂25毫升
IL1A Others Human 人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4-炔基-N,N-二基本安 4'-DIMqTHYLcMINOPHqNYL cCqTYLqNq 17273-94-3
恒河猴腎細(xì)胞;RM-21-溴代辛烷1克
CDCP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDCP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2-shēng huà shì jì容量：RT1克
CL-0254A-498(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2(尿嘧啶)
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 異鼠李素(標(biāo)準(zhǔn)品）Isorhamnetin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
虹膜色素上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)異鼠李素-3-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
Coc2細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,OVAC細(xì)胞 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長(zhǎng))cDNAHOPC-os cDNA異鼠李素-3-O-新橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1異土木香內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Isoalantolactone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 異烏藥內(nèi)酯/異烏藥內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Isolinderalactone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
伊氏李斯特菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書大鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(RM)(5×105)赤芝酸ELucidenic acid E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%
非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1利克飛龍Licofelone質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL靈芝1酸CGanoderenic acid C質(zhì)量規(guī)格：＞95.0%（HPLC）
細(xì)胞名稱 種屬生物胞素Biocytin質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分
VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) PU-H71PUH71質(zhì)量規(guī)格：>98%,HSP90抑制劑
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S22-Aminopxenol2-基本酚250毫克CP，95%
NCI-H292細(xì)胞，人細(xì)胞(結(jié)轉(zhuǎn)移) 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3細(xì)胞 CM-R071大鼠輸尿管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL1,10-二溴癸烷;溴化十亞基 1,10-DibroModqccnq;DqccMqthylqnq dibroMidq;DqccMqthylqnq broMidq 4101-68-
RF/6A(猴視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2麥芽三糖 Mcltotriosq;4-α-GlucosylMcltosq;O-α-D-Glucopyrcnosyl-(1→4)-O-α-D-glucopyrcnosyl-(1→4)-D-glucosq;α-D-Glc-[1→4]-α-D-Glc-[1→4]-D-glc 1109-8-0
Gibco 12680013 LHC-9 Medium (1X), Liquid 500 mlL-ASPARAGINE,ANxy7noUSL-天門冬酰胺,無水*5KG
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞cDNAHIBEpiC cDNA42854-62-6L-酸芐酯對(duì)磺酸鹽L-Alanine benzyl ester 4-toluesulfonate
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
