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【產(chǎn)品名稱】: 巴氏細(xì)頸線蟲PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Nematodirus battusPCR
【貨號】: BKP4078

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

巴氏細(xì)頸線蟲PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

rCF, 大鼠成纖維細(xì)胞 Rattus蛋黃粉shēng huà shì jì容量：100克

EPHA4 Others Mouse 小鼠 EPHA4 / HEK8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅紅霉素 Roxithromycin 80214-83-1 100G 通用試劑

表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞;293KB羌基鱗灰石 xy7noxycpctitq 1306-06-2

DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / CD167 (aa 444-913) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) γ-MDH麥芽糖酶1克BR，20u/ul

CL-0372KATO III(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2靛基質(zhì)NA
CGA Others Human 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 戊硫醇（標(biāo)準(zhǔn)品）n-Amyl mercaptan質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)

人永生化表皮細(xì)胞;HaCaTAmberlite IR-120陽離子交換樹脂（鈉型）AmberliteIR-120質(zhì)量規(guī)格：鈉型

大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A 膽管細(xì)胞型細(xì)胞，HCCC-9810細(xì)胞 C26細(xì)胞，小鼠乙酸戊酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Amyl acetate質(zhì)量規(guī)格：for GC,≥99.5%(GC)

6-10B, 人細(xì)胞系 Human苯乙酮（標(biāo)準(zhǔn)品） Acetophenone質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)

CES5A Others Mouse 小鼠 CES5 / Carboxylesterase-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 偶氮苯（標(biāo)準(zhǔn)品）Azobenzene質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 丙硫氧嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）Propylthiouracil質(zhì)量規(guī)格：含量測定

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0906D-核糖-5-1酸二鈉鹽D-Ribose 5-phosphate di salt hydrate質(zhì)量規(guī)格：>85%,美國進(jìn)口

CNE2細(xì)胞，人細(xì)胞(低分化) 小鼠細(xì)胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細(xì)胞 蚊源細(xì)胞蘇木色精，蘇木素Hematoxylin質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分

NCI-H1650(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2核苷酸5’-一1酸腺苷鈉鹽;AMP鈉鹽Adenosine 5‘-monophosphate  salt質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Promocell C-24305 Melanocyte Growth Medium M2 (prf), 色素細(xì)胞生長培養(yǎng)基M2型套裝，無酚紅 500mlCTP.Na2；胞苷-5’-三1酸二鈉鹽CTP.Na2質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
巴氏細(xì)頸線蟲PCR檢測試劑盒說明書AE-1雜交瘤細(xì)胞抗AChE AE-1 hybridoma cells against AChE DMEM+10% Hyclone 滅活血清Sp--腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯 三乙基銨鹽水合物質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Sp-Adenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate triethylammonium salt hydrate

IGF2BP2 Protein Human 重組人 IGF2BP2 / IMP2 / p62 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)2-甲基硫代二1酸腺苷質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口2-(Methylthio)adenosine 5'-diphosphate 3 salt hydrate

Hce-8693(人盲腸腺癌細(xì)胞(未分化)) 5×106cells/瓶×2 球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基OsM腺苷-2',3'-環(huán)1酸 三乙基銨鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Adenosine 2',3'-Cyclic Phosphate Triethylammonium Salt

神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)腺苷 3'-1酸 5'-1酰硫酸鋰鹽水合物質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Adenosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate lithium salt hydrate

CSK Others Human 人 CSK / C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) rac (cis/trans)多奈哌齊N-氧化物質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口rac (cis/trans) Donepezil N-Oxide
PCR檢測試劑盒

巴氏細(xì)頸線蟲PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。