產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4074 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
奈瑟菌群PCR檢測(cè)試劑盒說明書 | Neisseria meningitidis AAPCR | BKP4074 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)/1ml甘酰-L-谷酰,英文名或英文縮寫:Glycyl-L-glutamine,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:1克
IL4R Others Rat 大鼠 IL4R / Il4ra 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) BOC-S-Trityl-L-半... Boc-Cys(Trt)-OH,97% 21947-98-8 1G 通用試劑
人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30鐵蛋柏(2-8℃) FqRRITIN, HUMcN 9007-73-
OS-RC-2細(xì)胞,人細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,CT-26.WT細(xì)胞 CL-0194RF/6A(猴視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-Fluorobenzdehyde間扶25克CP
V79(倉鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21667-99-8媒染蘭 29Mordant Blue 29
CHOdhfr細(xì)胞,二氫葉酸缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞 人癌細(xì)胞系,1590細(xì)胞 人星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HAL正(Standard for GC,>99.5%(GC))1-Hexanol質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99.5%(GC)
猴腎細(xì)胞;vero IgRCD4-正(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%(GC))1-Hexanol質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%(GC)
IL12A Others Human 人 IL12A / NKSF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 十六醇(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))1-Hexadecanol質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
豬腎細(xì)胞;LLC-PK11,6-己二醇(standard for GC)1,6-Hexanediol質(zhì)量規(guī)格:standard for GC
ERBB4 Others Rat 大鼠 HER4 / ErbB4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 十七烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Heptadecane質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
奈瑟菌群PCR檢測(cè)試劑盒說明書MKN-45細(xì)胞,人低分化細(xì)胞 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)C細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2氘代DMSO-D6(10 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%
CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%
CA10 Others Human 人 CA10 / CARPX 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%
人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN氘代DMSO-D6(100g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%
NRN1 Others Human 人 NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 乙酸銨(色譜級(jí))Ammonium acetate質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%
SD大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells5-尿苷三嶙酸四鈉鹽25克
BT-325細(xì)胞,人神經(jīng)細(xì)胞 空腸彎曲菌 人胚皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-ESF-1α-基-4-羥基肉桂酸 α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid,≥98% 28166-41-8 1G 通用試劑
SNU-5(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2L(-)-巖藻糖 L-FUCOSq 438-80-4
Hep G2(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0442SK-NEP-1(人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人胚胎肌肉組織來源細(xì)胞;CCC-HSM-2麗春紅S100克
人細(xì)胞;SF1269001-22-3β-葡萄糖苷酶 杏仁 (+4℃)BETA-GLUCOSIDASE
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:奈瑟菌群PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。