產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4051 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
生殖支原體PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng) | Mycoplasma genitaliumPCR | BKP4051 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-11000ul無菌盒裝吸頭shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1毫克
IL1R2 Others Human 人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 日落黃 Sunset Yellow FCF 2783-94-0 25G 通用試劑
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]染料木皇同(-20℃) Gqnistqin 446-7-0
IGFBP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶抑制劑,大豆試劑級(jí)米白色凍干粉FROZENsigma
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)20624-25-3銅試劑wo7ium dietxyldithiocarbamate trihydrate
CSNK1A1 Others Human 人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)Copper solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:1%HNO3
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Cobalt standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml
MDA-MB-231細(xì)胞,癌細(xì)胞 人細(xì)胞,Bel-7402細(xì)胞 CL-00086T-CEM (人T細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:水) Chromium Standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,溶劑:水
倉鼠源細(xì)胞鉺標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Erbium standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3
CDH8 Others Human 人 Cadherin-8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 金標(biāo)準(zhǔn)溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液)Gold solution質(zhì)量規(guī)格:100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液
生殖支原體PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)CTSD Others Human 人 Cathepsin D / CTSD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) Ac-rC亞1酰胺單體Ac-rC Phosphoramidite質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
DLD-1 人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞Rp-腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯鈉鹽Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, Salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
CMVECs微內(nèi)皮細(xì)胞 CMVECs micro vascular endothelial cells DMEM+10%FBSSp--腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯 三乙基銨鹽水合物Sp-Adenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate triethylammonium salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
TNFSF12 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)2-甲基硫代二1酸腺苷2-(Methylthio)adenosine 5'-diphosphate 3 salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
人小梁網(wǎng)細(xì)胞(HTMC)(5×105) 3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞 Mouse腺苷-2',3'-環(huán)1酸 三乙基銨鹽Adenosine 2',3'-Cyclic Phosphate Triethylammonium Salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
IL10RB Others Rat 大鼠 IL10RB / IL10R2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4-酚,英文名或英文縮寫:4-xy7noxypyridine,級(jí)別:AR,98.5%,規(guī)格:250毫克
人腎上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(S)-(-)-α-基-γ... (S)-(-)-3-Aminotetrahydrofuran-2-One H... 2185-3-7 250MG 通用試劑
B16F10細(xì)胞,小鼠色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞;hFOB 1.19L-乳醋內(nèi)鹽(1-13C) L-LcCTIC cCID, wo7ium ScLT (1-13C) 8173-81-6
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白氧化金shēng huà shì jì容量:RT500毫升
SHG-44 (人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1115-69-1N-乙酰-DL-α-酸2-Acetylamino-propionic acid
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:生殖支原體PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。