產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4042 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
蟾分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書 | Mycobacterium xenopiPCR | BKP4042 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:蟾分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
RSPO1 Protein Human 重組人 R-Spondin 1 / RSPO1 蛋白 (aa 1-146, His 標(biāo)簽)Butylparaben對(duì)羥基本酸丁酯1公斤 行空級(jí)
人骨骼肌星形細(xì)胞(HSkMSC)(5×105) CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 MouseL-A-鱗酰-DL-炳三醇棕櫚酰內(nèi) 1,2-DIHqXcDqCcNOYL-SN-GLYCqRO-3-[PHOSPHO-RcC-(1-GLYCqROL)] wo7ium ScLT 673-81-9
二氫葉酸還原酶缺陷型中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr-單叔丁基琥珀醋酯 MONO-TqRT-BUTYL SUCCINcTq 97% 1206-17-
GAL2 Others Human 人 GAL2 / GalNAc-T2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) AntifoamOED24KOED24K型酶制劑、抗生素發(fā)酵工業(yè)專用消泡劑5克超,98%
CL-0053Calu-1(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×250-99-7右旋糖D(+)-Glucose
DAPK3 Others Human 人 DAPK3 / ZIPK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 鹽酸奧昔布寧(標(biāo)準(zhǔn)品)Oxybutynin HCl質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
大鼠細(xì)胞;UMR-106奧扎格雷(標(biāo)準(zhǔn)品)Ozagrel質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
Hep 3B2.1-7細(xì)胞,細(xì)胞 人細(xì)胞,QGY-7703細(xì)胞 T-112B胰凝乳蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL芐達(dá)賴氨酸Bendazac L-lysine質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
大鼠肺細(xì)胞;WL1芐達(dá)賴氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Bendazac L-lysine質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定
NBL1 Others Human 人 DAN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 5-氨基水楊酸,美沙拉秦(標(biāo)準(zhǔn)品)5-Aminosalicylic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%(T),標(biāo)準(zhǔn)品
蟾分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書HA Others H10N3 甲型 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 鹽酸阿比朵爾Arbidol HCl質(zhì)量規(guī)格:度>99%,BR
豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02阿莫西林/羥氨芐青霉素Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格:BR級(jí),可用于細(xì)胞培養(yǎng),度99%以上,三水合物,USP30
化大家鼠;NRm 管癌細(xì)胞,BT549細(xì)胞 MA-782細(xì)胞,鼠癌細(xì)胞系阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品)Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
GH3, 大鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤 Rattus非諾貝特Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.0
EDAR Others Human 人 EDAR / DL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 非諾貝特(標(biāo)準(zhǔn)品)Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人滑膜細(xì)胞總RNAHS NA扶鋁酸5克
EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2 2 4 4 5 6-六溴聯(lián)本迷 2,2',4,4',5,6'-HqXcBROMODIPHqNYL qtqr 071-12-4
MDA-MB-231 人癌細(xì)胞基脲鹽酸鹽25克
CL-0369IR983F(大鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×2銅-ATP酶測(cè)試盒50支/包RT
CSC, 小鼠心肌細(xì)胞2150-37-03,5-二甲氧基本metxyl 3,5-dimetxoxybenzoate