產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP3906 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) |
等孢球蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) | Isospora spp.PCR | BKP3906 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
BST2 Others Mouse 小鼠 TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 油醇,英文名或英文縮寫(xiě):Terpineol,級(jí)別:AR,99%,規(guī)格:500克
小鼠卵巢成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL三拂磺醋鋇 BcRIUM TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 794-60-7
P9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 P9 mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS化四甲基,英文名或英文縮寫(xiě):Tetrametxylammonium iodide,級(jí)別:AR,98%,規(guī)格:1克
白細(xì)胞介素-12超家族β-酸乙酯鹽酸鹽10克RT
SW 1353(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CBRH-7919(大鼠細(xì)胞)pxenmetxosulfate 1g /5g /10g/25g Amresco 0361
MLTC-1(小鼠間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2西吡氯銨(標(biāo)準(zhǔn)品)Cetylpyridinium chloride質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
Promocell C-23110 Fibroblast Growth Medium KIT,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml硫酸羥氯喹(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydroxychloroquine sulfate質(zhì)量規(guī)格:UV法溶出度檢查
細(xì)胞車(chē)葉草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Asperuloside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
TSLP Others Mouse 小鼠 TSLP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Galeterone (TOK001)TOK-001質(zhì)量規(guī)格:>98%,CYP17抑制劑
G422瘤 神經(jīng)山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷Kaempferol 3-sophoroside-7-rhamnoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥85%,標(biāo)準(zhǔn)品
等孢球蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)ANGPTL4 Protein Mouse 重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽)1,5-二溴蒽(>97.0%(GC))1,5-Dibromoanthracene質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1,8-二蒽(>98.0%(GC))1,8-Diiodoanthracene質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
獼猴肺細(xì)胞;MML29-酮基利培酮9-Keto Risperidone質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
人氣管平滑肌細(xì)胞 (HTSMC)( 5×105 )6-去氟-6-羥基利培酮6-Desfluoro-6-hydroxy Risperidone質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
CL-0260BC-021(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×27-羥基利培酮7-Hydroxy Risperidone質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
SGC-7901 人細(xì)胞R-聯(lián)萘酚1酸酯質(zhì)量規(guī)格:>99%(R)-(-)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl hydrogenphosphate
CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×22,6-二氯嘌呤質(zhì)量規(guī)格:>97%,原裝進(jìn)口2,6-Dichloropurine
mCF, 小鼠成纖維細(xì)胞2,4-二氯喹唑啉質(zhì)量規(guī)格:>98%2,4-Dichloroquinazoline
人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA 人直腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL9-氯甲基蒽質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)口原裝9-(Chloromethyl)anthracene
人纖維細(xì)胞;HT-10801-溴蒽(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)1-Bromoanthracene
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:等孢球蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。