產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3905 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
伊派病毒PCR檢測試劑盒直銷 | Ippy Virus(IPPYV)RTPCR | BKP3905 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
CL-0252A2(人腺樣囊性癌細胞)5×106cells/瓶×2本扎錄,英文名或英文縮寫:HDBAC,級別:IND,規(guī)格:25克
人低分化;SK-LU-1 大鼠腦內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL雌摸司汀鱗醋內(nèi) (17-bqtc)-qstrc-1,3,5(10)-triqnq-3,17-diol 3-(bis(2-chloroqthyl)ccrbcmctq) 17-(dixy7nogqnphosphctq) diwo7ium sclt 202-73-9
MMQ 小鼠細胞申醋 LqcD(II) cRSqNcTq 3687-31-8
TIMP2 Others Human 人 TIMP2 / TIMP-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-甲基-1H-咪唑,英文名或英文縮寫:4-metxylimidazole,級別:LR,規(guī)格:500克
色素細胞生長添加物(不含TPA)MelGS-22304-96-3N-芐氧羰基-L-天冬堿N-Benzyloxycarbonyl-L-asparagine
MMP8 Others Human 人 MMP8 / CLG1 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰胺(Standard for GC,≥99.5%(GC))Acetamide質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
中國倉鼠肺細胞;V79茴香醛(Standard for GC,≥99%(GC)) p-Anisaldehyde質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99%(GC)
EPHA1 Others Mouse 小鼠 EphA1 / EPH receptor A1 人細胞裂解液 (陽性對照) 癸二酸二辛酯(DOS)(Standard for GC, ≥98.5% (GC))Bis(2-ethylhexyl) sebacate質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥98.5% (GC)
A549 肺腺癌1,4-丁二醇(BDO)(standard for GC,≥99%(GC))1,4-Butanediol質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99%(GC)
Li-7人細胞 Li-7 human hepatocarcinoma cells 1640+10%FBS1,2,4-丁三醇(BT)(standard for GC,≥99.5%(GC))(±)-1,2,4-Butanetriol質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)
伊派病毒PCR檢測試劑盒直銷CRT(人神經(jīng)細胞) 5×106cells/瓶×2 腸內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)草酸亞錫(>98%,BR)Tin (II) oxalate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人脊髓星形膠質(zhì)細胞HA-sp二氧化錫(> 99%,BR)Tin (IV) oxide質(zhì)量規(guī)格:> 99%,BR
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸亞鈦(>98%,BR)Titanium (III) sulfate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)硫酸鈦(>96%,BR)Titanium (IV) sulfate質(zhì)量規(guī)格:>96%,BR
801-D細胞,人巨細胞性細胞 轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控,含EGFP基因的CHO細胞,CHO-AA8細胞 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基100mL檸檬酸三丁酯(>98%,BR)Tributyl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
NCI-H1395人 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1395 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS[Tyr9]- β-促激素 (豬)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR[Tyr9]- β-MSH (porcine)
FAM3D Protein Human 重組人 FAM3D 蛋白 (His 標(biāo)簽)α-心鈉素(1-28), human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRα-ANF(1-28), human
293來源病毒包裝細胞;ΦA 人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLα-促激素質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRα-MSH
人髓核細胞總RNAHNPC NAβ-淀粉樣蛋白(1-42),人質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRβ-Amyloid Peptide (1-42), human
REG1A Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1A / PSPS 人細胞裂解液 (陽性對照) [Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺激素(7-34)酰胺 (牛)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:伊派病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。