產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3829 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
人病毒型通用PCR檢測試劑盒直銷 | Human Immunodeficiency Virus 1(HIV1)IRTPCR | BKP3829 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:人病毒型通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白十八烷基基錄化shēng huà shì jì容量:10克
小小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA-c)(5×105) MG-63, 人細(xì)胞 HumanL-酪酸二鈉 L-Tyrosine di salt (HPLC,≥98%) 69847-45-6 5G 通用試劑
大鼠肺泡上皮細(xì)胞RPAEpiC加醋異炳酯 Isopropyl forMctq;ForMic ccid isopropyl qstqr 62-22-8
ENPP2 Others Mouse 小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 對稱二本基偶氮羰酰shēng huà shì jì容量:RT5克
HEL2 人胚胎(女)2550-26-74-本基-Benzyleetone
TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 維生素B2(標(biāo)準(zhǔn)品)vitamin B2質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
CM-M005小鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL核黃素,維生素B2vitamin B2質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
KYSE 450細(xì)胞,人食管鱗癌 神經(jīng)細(xì)胞,CRT細(xì)胞 家兔腎細(xì)胞;RABK3維生素D2(標(biāo)準(zhǔn)品)vitamin D2質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2磺胺異噁唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulfisoxazole質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
PECAM1 Others Human 人 CD31 / PECAM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 膠蒼術(shù)甙,羧基蒼術(shù)苷二鉀鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)Carboxyatractyloside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人病毒型通用PCR檢測試劑盒直銷人內(nèi)殼細(xì)胞(HHirSC)( 5×105 )Trt-dUTrt-dU質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CL-0447SW 1353(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì))N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
人細(xì)胞;Hela 229 [HeLa229] 大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-三苯甲基洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì)H)N-Trityl Losartan (Losartan Impurity H)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
P815 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞洛沙坦-d3Losartan-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
PI3 Others Human 人 Elafin / WFDC14 / appin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羧酸洛沙坦Losartan Carboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
非洲綠猴腎細(xì)胞;Vero E6奧氮平硫代內(nèi)酰胺雜質(zhì)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Olanzapine Thiolactam Impurity
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞2-羥甲基奧氮平質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口2-Hydroxymethyl Olanzapine
人B細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS(RA.1) 大鼠胰腺星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-去甲基奧氮平質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口N-Demethyl Olanzapine
視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N-氧基奧氮平質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Olanzapine N-Oxide
AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 氨1汀硫醇二鹽酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Amifostine Thiol Dihydrochloride