產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3811 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
莢膜組織胞漿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Histoplasma capsulatumPCR | BKP3811 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:莢膜組織胞漿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
REG3D Others Mouse 小鼠 REG3D 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) NEXTGEL10%SOLUTIONNext Gel 10%蛋白組學(xué)級透明無色液體RTsigma
狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL13,4-二 3,4-Dimethoxybenzyl alcohol,96% 1993-3-8 5G 通用試劑
GLIPR1 Others Mouse 小鼠 GLIPR1 / RTVP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 糠安;2-呋安;麩安 FurfurylcMinq;2-FurcnMqthylcMinq;2-FurylMqthylcMinq
破骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N-Fmoc-N'-三本甲基-D-半胱酸,英文名或英文縮寫:Fmoc-D-Cys(Trt)-OH,級別:特,98%,規(guī)格:25克
Cyc-tAg細(xì)胞,小鼠T細(xì)胞瘤(SV40T抗原轉(zhuǎn)染) 人紫杉醇耐藥株,A2780/Taxol細(xì)胞 人肺動脈成纖維細(xì)胞裂解物HPAFL高錄酸銨(*)(易)AMMONIUM PERCHLORATE
成骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)依諾沙星(水溶性)Enoxacin質(zhì)量規(guī)格:依諾沙星含量≥60%
HCC-9204細(xì)胞,細(xì)胞 人細(xì)胞,HeLa細(xì)胞 人角膜上皮細(xì)胞cDNAHCEpiC cDNA氧氟沙星Ofloxacin質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1氧氟沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Ofloxacin質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
CSF3R Others Human 人 CD114 / G-CSFR / GCSFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 阿巴卡韋 Abacavir質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK阿巴卡韋 (標(biāo)準(zhǔn)品)Abacavir質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
莢膜組織胞漿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1吡嗪(>98.0%(GC))Pyrazine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠色素瘤細(xì)胞;B16-F1 小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2,3-吡嗪二羧酸(>98.0%(HPLC)(T))2,3-Pyrazinedicarboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 Rattus茴香偶酰(>98.0%(GC))p-Anisil質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
ACVR2A Others Human 人 ACVR2 / ACII / ACVR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苯偶酰(>99.0%(GC))Benzil質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞HN-h苯偶酰 (區(qū)域精制法精制,熔段數(shù):22)Benzil Zone Refined (number of passes:22)質(zhì)量規(guī)格:
HEL299細(xì)胞,紅白細(xì)胞細(xì)胞 巨核細(xì)胞,Dami細(xì)胞 人纖維細(xì)胞;HT-1080BOC-ON2-(叔-丁氧基碳酰胺)-2-本以100毫克BR,99%
KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422牛磺膽酸鈉 taurocholate hydrate,≥97.0% 145-42-6 1G 通用試劑
CD226 Others Mouse 小鼠 DNAM-1 / CD226 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 馬脲酰組安酰亮安醋(-20℃) HIPPURYL-HIS-LqU 31373-62-6
人上皮細(xì)胞HMEpiCβ-葡萄糖苷酸酶100克
FCGR2B Others Rat 大鼠 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) PH緩沖液 PH12.0(20℃)NA