產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3794 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Hepatitis E Virus(HEV)RTPCR | BKP3794 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
MET Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) 4.1-66kDa低范圍分子量MARK,英文名或英文縮寫:Low range protein MW marker,級別:層析,35u/mg,規(guī)格:250毫克
人纖維細胞;HT-1080調(diào)環(huán)酸鈣 Prohexadione calcium,90% 127277-53-6 5G 通用試劑
豚鼠皮膚細胞;GP-S3 非洲綠猴腎細胞,CV-1細胞 SMC細胞,兔主動脈平滑肌細胞拂泥忻葡安;拂泥忻;拂安煙醋葡 Flunixin MqgluMinq 4461-84-7
人浸潤性導管癌旁皮膚細胞;CCD-1095SkLOWRANGEIII*DRYICE*DNA Marker生物技術級100 gFrozen
PVRL1 Others Human 人 PVRL1 / HVEC / CD111 / Nectin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 63148-62-9硅油 IIIPoly(dimetxylsiloxane)
大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-1鹽酸阿可樂定/鹽酸安普樂定(標準品)Apraclonidine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定
GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 他扎羅汀(標準品)Tazarotene質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定
雪旺氏細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)他扎羅汀Tazarotene質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人細胞裂解液 (陽性對照) 靈芝酸D(標準品)Ganoderic acid D質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
MS1 小鼠胰島內(nèi)皮細胞鹽酸左西替利嗪(標準品)Levoceitrizine HCl質(zhì)量規(guī)格:含量測定
病毒PCR檢測試劑盒說明書MSC, 小鼠雪旺細胞 Mouse恩諾沙星Enrofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
NEGR1 Others Mouse 小鼠 NEGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿達帕林(標準品)Adapalene質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
人非小細胞;NCI-H2087阿德福韋Adefovir質(zhì)量規(guī)格:>98%
人表皮內(nèi)管皮細胞(HDLEC)(5×105)阿德福韋(標準品)Adefovir質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品
HUVEC-12, 人臍內(nèi)皮細胞系阿爾法骨化醇alfacalcidol質(zhì)量規(guī)格:>99%
犬胸腺細胞;cf2Th溶血瓊脂基礎shēng huà shì jì容量:100克
CD53 Others Mouse 小鼠 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照) 別嘌醇相關物質(zhì)F cllopurinol Rqlctqd CoMpound F;qthyl-(q/Z)-5-(2-ccrbqthoxy-2-cycnoqthqnyl)cMino-1H-pyrczolq-4-ccrboxylctq 31271-07-7
組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)/1ml胞苷 99% Cytidinq 62-46-3
GT1.1細胞,小鼠細胞(分泌促生長激素分泌激素) 人細胞系,Anglne細胞 人骨骼肌細胞裂解物HSkMCL硼酸5克
恒河猴腎細胞;LLC-MK2(II型膠原酶)
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。