產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3757 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒直銷 | Haemophilus influenzae BBPCR | BKP3757 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
WIF1 Others Mouse 小鼠 WIF1 / WIF-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-FRUCTOSED-果糖*白色精細(xì)粉末RTsigma
大鼠骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2′-脫氧腺苷-5′-... 2′-Deoxyadenosine 5′-triphosphate di... 74299-50-6 25MG 通用試劑
293TN人胚腎細(xì)胞--用于慢病毒包裝 293TN human embryonic kidney cells -- for leiviral packaging DMEM+10%FBS+500ug/ml G418三十六烷;正三十六烷 Hqxctriccontcnq 630-06-8
IFNG Protein Ferret 重組雪貂 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標(biāo)簽)LIGHTGREENSFYELLOWISH亮綠*深紫紅色精細(xì)粉末RTsigma
HuT 78(人T細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 阪崎腸桿菌125-31-5對兒價分藍(lán)P-xyleol BLUE
人胚;CCC-HPF-1依澤替米貝β-D-葡萄糖苷酸Ezetimibe β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
HA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 安普那韋-d4Amprenavir-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)4'-羥基華法林4'-Hydroxy Warfarin質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
ASGR2 Others Human 人 ASGR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6-羥基華法林6-Hydroxy Warfarin質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL7-羥基華法林7-Hydroxy Warfarin質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒直銷EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)變色酸2RChromotrope 2R質(zhì)量規(guī)格:AR
293ET(人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞)) 5×106cells/瓶×2 原代心肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml1鉬酸Phosphomolybdic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格:BC
人虹膜色素上皮細(xì)胞cDNAHIPEpiC cDNA甘氨酸Glycine質(zhì)量規(guī)格:>99%,美侖
小鼠骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞(MMSC-bm)(5×105)甘氨酸(Sigma)Glycine質(zhì)量規(guī)格:>98%,sigma分裝
大鼠腦細(xì)胞;C6L-甘氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)L-Glycine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人平滑肌細(xì)胞cDNAHBVSMC cDNALanolin無水羊毛脂100毫克GR
NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,5-二錄水楊全 3,5-DICHLOROScLICYLcLDqHYDq 90-60-8
小鼠瘤株;H22IAA3-吲哚酸100KU超,99%
GBC-SD細(xì)胞,人細(xì)胞 人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WD10細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1AldehydeDexy7nogenase,potewwium-activated乙醛脫氫酶25克BR,5′d(NNN NNN NNN)3′
Li-7(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×295-64-73,4-二3,4-Dimetxylaniline