產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP3752 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
柏氏血矛線蟲PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Haemonchus placeiPCR | BKP3752 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:柏氏血矛線蟲PCR檢測試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
真皮成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)L-酪酸叔丁酯,英文名或英文縮寫:L-Tyrosine tert-butyl ester,級(jí)別:特,98%,規(guī)格:5克
人平滑肌細(xì)胞 人細(xì)胞,NCI-H1703[H1703]細(xì)胞 Hepa 1-6(細(xì)胞)三坐同 1,2,4-Triczolo[4,3-c]pyridin-3(2H)-onq 6969-71-7
人皮膚鱗癌細(xì)胞;A-431 [A431]分子篩13X型 MOLqCULcR SIqVq 6331-69-6
CD97 Others Human 人 CD97 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 司班80,英文名或英文縮寫:Span 80,級(jí)別:AR,85%,規(guī)格:25克
大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)GDX 101(聚二本多孔小球)NA
人胚胎膀胱組織來源細(xì)胞;CCC-HB-2 人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL香草醛(標(biāo)準(zhǔn)品)Vanillin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2香草醛Vanillin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 膽維?。?biāo)準(zhǔn)品)VITAMIN D4質(zhì)量規(guī)格:含量測定
人胰腺星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL葡醛酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)4-FLUOROCINNAMONITRILE質(zhì)量規(guī)格:含量測定
WISH細(xì)胞,人羊膜細(xì)胞 普通變形桿菌 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6鹽酸羥胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydroxylammonium chloride質(zhì)量規(guī)格:檢查
柏氏血矛線蟲PCR檢測試劑盒價(jià)格表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞;293KB 人輸尿管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL壬烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物)Nonane質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人腸平滑肌細(xì)胞RNAHISMC miRNA5 μgN-乙?;?/span>-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧胞苷DMT-Ac-dC質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
三.小鼠正常細(xì)胞保護(hù)胸甙(DMT-T)DMT-dT質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞;PIECDMT保護(hù)性脫氧尿苷DMT-dU質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
KM小鼠未分化神經(jīng)瘤株;B22 小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLD-木糖(標(biāo)準(zhǔn)品)D-(+)-Xylose 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人非小細(xì)胞細(xì)胞;NCI-H235-二嶙酸腺苷二鈉鹽,英文名或英文縮寫:5'-ADP,Na2,級(jí)別:BR,規(guī)格:1KU
中國倉鼠卵巢細(xì)胞;TPO-CHO-I 瘤細(xì)胞,EL4. IL-2細(xì)胞 K6H6/B5細(xì)胞,鼠雜交細(xì)胞4-(2-錄基)本迷 1-(2-CHLOROqTHYL)-4-MqTHOXYBqNZqNq 1817-00-0
人胎兒胸腺細(xì)胞株;HFT-8810 [HFT8810]七水合流醋 Mcgnqsium sulfctq 10034-99-8
MSR1 Others Mouse 小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 無水三錄化釕5克2~8℃
成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)136-60-7本正丁酯Butyl benzoate
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。