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【產(chǎn)品名稱】: 杰米斯頓病毒PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Germiston VirusRTPCR
【貨號】: BKP3730

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

杰米斯頓病毒PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

VERO細胞，非洲綠猴腎細胞 人大細胞細胞,NCI-H661細胞 CL-0420R 1610(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×2二(2-乙基己基)嶙酸酯，英文名或英文縮寫：P-204，級別：BR，25-28%，規(guī)格：500克

倉鼠腎細胞;HL-1本迷;大茴香迷;茴香迷;氧基本;基本基迷 cnisolq;Mqthoxybqnzqnq

GRN Others Human 人 Granulin / GRN 人細胞裂解液 (陽性對照) READYLADDER,50BPDNAMARKERDNA MARKER生物技術(shù)級暗紫色不透明液體FROZENsigma

GC-1, 鼠精原細胞鎢酸鉀，英文名或英文縮寫：potewwium tungstate，級別：AR，95%，規(guī)格：500克

CD40LG Others Cynomolgus 食蟹猴 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) (轉(zhuǎn)鐵蛋白)
腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)雙羥萘酸（標準品）Pamoic acid質(zhì)量規(guī)格：含量測定

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) 酚酞（標準品）Phenolphthalein質(zhì)量規(guī)格：含量測定

大鼠上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL香草醛（熔點標準品） Vanillin質(zhì)量規(guī)格：熔點測定

BRL大鼠肝細胞 Rat hepatic cells BRL DMEM+10%FBS環(huán)吡酮;環(huán)匹羅司Ciclopirox質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (Fc 標簽)環(huán)吡酮;環(huán)匹羅司(標準品)Ciclopirox質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品
滑膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4-硝基鄰苯二甲腈(>98.0%(GC))4-Nitrophthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-硝基鄰苯二甲腈(>98.0%(GC))3-Nitrophthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

大鼠大隱內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL4,4'-雙甲氧基三苯甲基氯DMT-CL質(zhì)量規(guī)格：>97%

293FT人胚腎細胞-用于慢病毒包裝 Human embryonic kidney cell line 293FT - for leiviral packaging 人胚腎細胞N-苯甲酰-N-苯基羥胺;鉭試劑;BPHAN-Phenylbenzohydroxamic Acid;Tantalon質(zhì)量規(guī)格：>98%;AR

IFNA14 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 蛋白 (His 標簽)6-氯鳥嘌呤核苷6-Chloroguanosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
杰米斯頓病毒PCR檢測試劑盒說明書中國倉鼠肺細胞;V79異蓮心堿（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Isoliensinine

GHR Others Mouse 小鼠 GHR 人細胞裂解液 (陽性對照) 蓮心堿高氯酸鹽（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Liensinine Perchlorate

細胞凍存液CFM丁1基苯酞（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品川芎提取,液體3-Butylidenephthalide

FLT3 Others Mouse 小鼠 FLT-3 / CD135 / FLK-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 茯苓酸（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Pachymic acid

人胃腺癌細胞;BGC-823大黃素(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Emodin
PCR檢測試劑盒

杰米斯頓病毒PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。