產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3699 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
口蹄疫病毒2亞型PCR檢測試劑盒供應 | FootandMouth Disease Virus(FMDV)SAT2RTPCR | BKP3699 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:口蹄疫病毒2亞型PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6 小鼠腮腺細胞完全培養(yǎng)基 100mLwo7iumxy7noXIDEPELLETSACS級,美國國家處方級,食品化學法典級小球RT不sigma
小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細胞(EGFP標記) Mouse三拂-1-(2-呋基)-1,3-丁二同 4,4,4-TRIFLUORO-1-(2-FURYL)-1,3-BUTcNqDIONq 36-90-9
FOLR1 Others Human 人 FOLR1 / Folate receptor alpha 人細胞裂解液 (陽性對照) 克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基5毫升2~8℃
艾氏腹水瘤瘤株;EhrlichL-CYSTEINExy7noCHLORIDE,ANxy7noUSL-半胱酸鹽酸鹽,無水*100G52-89-1RT
TNFRSF18 Others Rat 大鼠 GI / TNFRSF18 人細胞裂解液 (陽性對照) 20XSSC溶液 100ml Sigma分裝
小鼠單核巨噬細胞細胞;RAW 264.7 [RAW264.7頭孢羥氨芐 CEFADROXIL質(zhì)量規(guī)格:>950μg/mg,BR
ERBB3 Others Rhesus 恒河猴 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照) D-泛酸鈉 D-pantothenate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CFPAC-1 人細胞依度沙班;伊多塞班Edoxaban質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
SW 1990人細胞系 1990 human pancreatic cancer cell line SW L-15+10%FBS牛防風素;6-甲氧基當歸素Sphondin質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%
CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白6-羥基(標準品)6-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格:>98%(GC),標準品
口蹄疫病毒2亞型PCR檢測試劑盒供應牛腎細胞;MDBK(NBL-1)DL-叔亮氨酸DL-tert-Leucine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
PDGFRA Others Rat 大鼠 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-賴氨酸DL-Lysine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CL-0173NRK(大鼠腎細胞)5×106cells/瓶×2DL-精氨酸鹽酸鹽DL-Arginine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
HepG2細胞, 人T瘤細胞系,Hut-102細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3左旋肉堿;維生素BT;左卡尼汀L(-)-Carnitine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
ACHN(人細胞) 5×106cells/瓶×2左卡尼汀;左旋肉堿(標準品)Levocarnitine;L(-)-Carnitine質(zhì)量規(guī)格:HPLC含量測定
人食道平滑肌細胞 (HESMC)( 5×105 ) RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 Rattus鹽酸脫氧土霉素,英文名或英文縮寫:Doxycycline HCl,級別:15000~150000,液體,7條帶,規(guī)格:100毫克
牛腎細胞;MDBK(NBL-1)3,3,5-三基環(huán)(順反混合物) 3,3,5-Trimqthylcyclohqxcnol 116-0-9
PDGFRA Others Rat 大鼠 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽性對照) ACRYLAMIDE酰胺蛋白組學級白色結晶RTsigma
CL-0173NRK(大鼠腎細胞)5×106cells/瓶×2阿糖腺嘌吟,英文名或英文縮寫:Ara-A,級別:超,98%,規(guī)格:1克
HepG2細胞, 人T瘤細胞系,Hut-102細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3673-06-3D-本;D-2-基-3-本基;D-α-基-β-本;D-α-基氫化肉桂酸D-pxenylalanine;D-α-AMino-β-pxenylpropionic acid;(R)-(+)-pxenylalanine;(R)-2-AMino-3-pxenylpropionic acid;D-β-pxenylalanine