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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

HPB-ALL細(xì)胞，T細(xì)胞細(xì)胞 人細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系,PC-3M 1E8細(xì)胞 人成纖維細(xì)胞總RNAHCF NANA1，英文名或英文縮寫：Nadic anhydride，級別：CP，規(guī)格：10克

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS3 3-Methyl-2-bu,≥98.5%  50ML 通用試劑

FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-高胱安醋流內(nèi)酯言醋鹽 L-HOMOCYSTqINq THIOLcCTONq xy7noCHLORIDq 3188-68-9

細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)烷砜shēng huà shì jì容量：100克

RBBP4 Others Human 人 RBBP4 / RBAP48 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3196-15-4α-溴2-Bromobutyric acid metxyl ester
小鼠質(zhì)神經(jīng)元MN-sn托拉塞米Torasemide質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32

CST3 Others Rat 大鼠 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 曲沃前列素Travoprost質(zhì)量規(guī)格：含>99.0%

HEL1 人胚肺成纖維樣細(xì)胞(男)鹽酸曲唑酮Trazodone HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

CM-R075大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鹽酸曲唑酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Trazodone HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

MGC80-3(MGC-803)人細(xì)胞曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷Trilostane質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR
腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒直銷破骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2-脫氧-L-核糖2-Deoxy-L-ribose質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

DDR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 DDR2 Kinase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-葡萄糖一水D-Glucose, monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317十二烷基硫酸鈉(分子生物學(xué)級)SDS質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級

LTEP-P細(xì)胞，人小細(xì)胞細(xì)胞 小鼠前成骨細(xì)胞,MC-3T3細(xì)胞 CL-0130K-562(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2聚乙二醇6000PEG 6000質(zhì)量規(guī)格：分子量5,000~7,000,分子生物學(xué)級

TF-1(人血液細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2吐溫20Tween 20質(zhì)量規(guī)格：CP
MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞順式六氫本二1100Rxn保存：-20℃

SV40T轉(zhuǎn)化人臍內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 人膀胱成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1-叔丁基-4-典本 1-TqRT-BUTYL-3-qTHYLCcRBODIIMIDq 1433-7-8

人角膜上皮細(xì)胞RNAHCEpiC miRNA5 μg豬膽粉100克RT，避光

EGF Others Mouse 小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) CATC瓊脂shēng huà shì jì容量：100毫升

水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S31735-17-7氘代環(huán)-D12CYCLOHEXANE-D12
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。