產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3662 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬鼻病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)PCR | BKP3662 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類合胞病毒 hRSV (A, rsb1734) glycoprotein G / RSV-G 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸,英文名或英文縮寫: acetate tetrahydrate,級別:CP,規(guī)格:25克
貂源細(xì)胞硅醋鋁 cncuxitq;cndclusitq 130-93-8
APOA1 Others Mouse 小鼠 APOA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DL-天冬素,英文名或英文縮寫:DL- Asparaning H2O,級別:BR,99%,規(guī)格:25克
透明質(zhì)酸酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL無水溴化鋅,英文名或英文縮寫:Zinc bromide,級別:超,規(guī)格:250毫升
CHO-K1-EGFP(CMV-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)倉鼠卵巢細(xì)胞亞株 CHO-K1-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) hamster ovary cell subline F-12K+10% Hyclone FBS(親合素)
胰凝乳蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL鹽酸阿糖胞苷1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
BEL-7404人細(xì)胞 BEL-7404 human hepatocarcinoma cells 1640+10% FBS鹽酸阿糖胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白鹽酸馬尼地平Manidipine Dihydrochlorid質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAEC) ( 5×105 ) rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞 Rattus鹽酸馬尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)Manidipine Dihydrochlorid質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98,標(biāo)準(zhǔn)品
雪羊皮膚細(xì)胞;SSHS1二氫睪酮,雄諾龍Stanolone/Androstanolone質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
馬鼻病毒PCR檢測試劑盒說明書小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C4阿扎那韋Atazanavir質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%
T-47D細(xì)胞,管癌細(xì)胞 人細(xì)胞,EC871214細(xì)胞 大鼠細(xì)胞;UMR-106阿卡地新(AICAR)Acadesine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B1蒲公英萜醇;蒲公英賽醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Taraxerol質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
CDH2 Others Human 人 Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 琥珀酸普卡必利Prucalopride Succinate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人;HFL1鹽酸納洛酮Naloxone HCl dihydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,二水合物,1類受體拮抗劑
CLEC4D Others Human 人 CLEC4D / CLECSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢地嗪鈉質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRCefodizime
人成纖維細(xì)胞裂解物HCFL頭孢地尼質(zhì)量規(guī)格:>92%,BRCefdinir
C7 Others Human 人 C7 / Compleme compone 7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Boc-D-谷氨酰胺質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BRBoc-D-Glutamine
人腦平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL赤霉素A4+7質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRGibberllin A4+7
MES-13細(xì)胞,小鼠腎小球系膜細(xì)胞 K562(慢性髓原) 豚鼠肺細(xì)胞;GP-F13,3'-二氨基二苯甲酮(>95.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)(T)3,3'-Diaminobenzophenone
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:馬鼻病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。