產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3655 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬病毒3型PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Equine Herpesvirus 3 (EHV3)3PCR | BKP3655 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:馬病毒3型PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
魚源細(xì)胞 人細(xì)胞,Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]細(xì)胞 JAR(胎盤絨毛癌細(xì)胞)D-色酸鹽酸鹽,英文名或英文縮寫:D-Tryptophan metxyl ester xy7nochloride,級別:BR,98%,規(guī)格:5克
人B細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS(RA.1)1,2,4-三基本 1,2,4-Trimqthylbqnzqnq 92-63-6
CD1d1 Others Mouse 小鼠 CD1D / R3G1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 分子篩3A型 MOLqCULcR SIqVqS 308080-99-1
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO-76有機硅消泡劑,英文名或英文縮寫:Silicone defoamer,級別:AR,99%,規(guī)格:5克
KDR Others Human 人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-酸-王樹脂NA
原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml鹽酸鑭六水(>99%,BR)Lanthanum (III) chloride, hexahydrate質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
ROBO4 Others Human 人 ROBO4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三氧化鉬(>98%,BR)Molybdic oxide質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
MDCK 狗腎細(xì)胞木瓜蛋白酶懸浮液Papain 2x crystallized from papaya Latex質(zhì)量規(guī)格:比活度:>20 U/mg,BC
散鱗鏡鯉尾鰭細(xì)胞;YZ21苯磺酸鈉(>98%,BR) benzenesulfonate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
U-2 OS, 人細(xì)胞過氧化物歧化酶(SOD)Superoxide dismutase from Bovine Erythrocytes(SOD)質(zhì)量規(guī)格:比活度:>5000 U/mg,BC
馬病毒3型PCR檢測試劑盒供應(yīng)人肺細(xì)胞;HLF-a2-芐基咪唑啉2-Benzylimidazoline質(zhì)量規(guī)格:美國進口
GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Amidopyrine/aminopyrine質(zhì)量規(guī)格:>98%,AR
恒河猴腎細(xì)胞;MMK3緊張素IIAngiotensin II質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR
Ls-174-T細(xì)胞,人細(xì)胞 人色素瘤細(xì)胞,SK23細(xì)胞 人細(xì)胞;Hela維生素 D3 ((膽骨化醇)Vitamin D3質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)4000萬IU/g
HCCC-9810(人肝內(nèi)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2帕唑帕尼鹽酸鹽Pazopanib HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
牛腎細(xì)胞;MDBKFerricxy7noxide有水氧化鐵1克2.7N,99.7%
GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,3-二氧基聯(lián)本安二言醋鹽 3,3'-Dimqthoxybqnzidinq dixy7nochloridq 032-40-0
腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 ×105方(1ml)D-Tryptophanmetxylesterxy7nochlorideD-色酸鹽酸鹽5克BR,98%
團頭魴尾鰭細(xì)胞;WCF 人卵巢,PA-1細(xì)胞 SK-OV-3(細(xì)胞)(R)--Leucinol(R)-2-基-4-甲基-1-5克BR,98%
人皮膚色素瘤細(xì)胞;SK-MEL-169-93-2尿酸Urea;8-xy7noxyxanthine;2,6,8(1,3,9)-Purinetrione;7,9-Dixy7no-1H-purine-2,6,8-(3H)-trione
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。