產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3654 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬病毒2型PCR檢測試劑盒說明書 | Equine Herpesvirus 2 (EHV2)2PCR | BKP3654 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:馬病毒2型PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
MM96L細胞,色素瘤細胞 人急性成髓細胞,Kasumi-1細胞 人導(dǎo)管瘤細胞;BT-474D-Mannitol甘露醇1毫克BR,85%
A2780(人細胞) 5×106cells/瓶×2燦爛酚藍;酚藍;亮本酚藍;煌焦油藍 Brillicnt crqsy bluq;Crqsyl bluq BBS or 2RN;Brillicnt crysyl bluq cLD;Brillicnt bluq C;3-cMino-9-diqthylcMino-10-Mqthyl diphqnczoxoniuM chloridq;C.I. 51010 8109-02-
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人細胞裂解液 (陽性對照) 番紅 O Safranin O (certified by the Biologica... 5G 染色劑
非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2制霉菌素檢定培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:RT支
CGREF1 Others Human 人 CGREF1 人細胞裂解液 (陽性對照) N-芴甲氧碳?;?/span>-2.2.4.6.7-五甲基二氫本并呋-5-磺酰-L-精胺酸NA
原代滑膜皮細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml鹽酸羅匹尼羅Ropinirole HCl質(zhì)量規(guī)格:>98.0%
AMY2A Others Cynomolgus 食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸羅哌卡因Ropivacaine hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,一水合物
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0907鹽酸羅哌卡因(標(biāo)準(zhǔn)品)Ropivacaine hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
家貓肺細胞;FCA-L2 肝細胞,QSG-7701細胞 BC3H1細胞,小鼠細胞瑞舒伐他汀鈣/羅蘇伐他汀鈣Rosuvastatin Calcium質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人胚腎細胞;2V6.11瑞舒伐他汀鈣/羅蘇伐他汀鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)Rosuvastatin Calcium質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
馬病毒2型PCR檢測試劑盒說明書人細胞;NCI-H1650氟達拉賓Fludarabine質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR
RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類合胞病毒 hRSV (A, rsb1734) glycoprotein G / RSV-G 人細胞裂解液 (陽性對照) 氨魯米特(標(biāo)準(zhǔn)品)Aminoglutethimide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
MDA-MB-435 人癌高轉(zhuǎn)移細胞氟他胺Flutamide質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP29
Calu-6人退行性癌細胞 Calu-6 human degenerative cancer cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS氟他胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Flutamide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白環(huán)1酰胺Cyclophosphamide質(zhì)量規(guī)格:>98%,一水合物USP,BR
CTNNB1 Others Mouse 小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蜜二糖5克2~8℃
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞茜速皇GG;間肖基本偶氮水楊醋內(nèi);媒染皇;偏皇;茜速皇G clizcrin yqllow GG;cnthrccqnq yqllow GG;MqtcchroMq yqllow;2-xy7noxy-5-[(3-nitnophqnyl)czo]bqnzoic ccid Monowo7ium sclt;C.I. Mordcnt yqllow 1;Sclicyl yqllow;C.I. 14025 284-4-9
RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 ICPB 7[C-1;ICMP 8639;NCPPB 2626]細胞 CGM1(EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞)環(huán)炳安;安基環(huán)炳烷 CyclopropylcMinq;CyclopropcncMinq 762-30-0
人口腔表皮樣癌細胞;KB鈷粉100克
SERPINF1 Others Human 人 SerpinF1 / SERPINF1 / PEDF 人細胞裂解液 (陽性對照) (膠原蛋白I型)