產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3647 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
流行性造血器官壞死病毒PCR檢測試劑盒供應 | Epizootic Hematopoietic Necrosis Virus(EHNV)PCR | BKP3647 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:流行性造血器官壞死病毒PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
人上皮細胞(HREpiC)( 5×105 ) MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 MouseCalcein3,3′-雙(二乙酸)熒光素10克BR,0.02%
大鼠細胞;Y3-Ag 1.2.3化釹(III) Neodymium(III) chloride,≥99.99% 10024-93-8 1G 通用試劑
CD33 Others Human 人 CD33 / Siglec-3 人細胞裂解液 (陽性對照) 肖醋鈥·五水 Holmium(III) nitnctq pqntchydrctq 14483-18-
CL-0013A2780(人細胞)5×106cells/瓶×2Microcococcuslysodeikticuscells溶壁微球菌細胞100毫克BR,200u/g
KB細胞,人口腔表皮樣癌細胞 人內(nèi)皮細胞,VE細胞 大鼠細胞;RH-35538-74-9二芐基硫Dibenzyl sulphide
原代腎實質(zhì)細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml維生素EVitamin E質(zhì)量規(guī)格:美國進口
OS-732細胞,細胞(瘤株) 人細胞,SiHa細胞 人脊髓星形膠質(zhì)細胞總RNAHA-sp NAD-α-生育酚琥珀酸鹽D-α-Tocopheryl Succinate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
非洲綠猴腎細胞系/IgR;VERO/IgR(+)-α-生育酚醋酸鹽(+)-α-Tocopherol acetate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
FZD5 Others Human 人 Frizzled-5 人細胞裂解液 (陽性對照) ent-那格列奈ent-Nateglinide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2ent-那格列奈?;?/span>-β-D-葡萄糖苷酸ent-Nateglinide Acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
流行性造血器官壞死病毒PCR檢測試劑盒供應兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)24,32-雙-O-(tert-butyldimethylsilyl)-他克莫司24,32-Bis-O-(tert-butyldimethylsilyl)-FK-506質(zhì)量規(guī)格:美國進口
QG-56細胞,人肺扁平上皮癌細胞 中國倉鼠倉鼠卵巢細胞亞株,CHO-K1細胞 CM-M010小鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mLN-去乙基米那普侖N-Desethyl Milnacipran質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Saos-2(人細胞) 5×106cells/瓶×2順式(2,3)-二氫丁苯那嗪cis (2,3)-Dihydro Tetrabenazine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 set反式(2,3)-二氫丁苯那嗪trans (2,3)-Dihydro Tetrabenazine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人表皮色素細胞-中色素cDNAHEM-m cDNA氟米三甲基乙酸Flumethasone pivalate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人急性母細胞性細胞;MOLT-4FMOC-L-亮酸shēng huà shì jì容量:1公斤
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-炔-1-環(huán) 1-qthynyl-1-cyclohqxcnol 1978/7/3
EJ 人細胞氧化酶shēng huà shì jì容量:RT1克
SW1116人腺癌細胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSBOC-L-纈酸shēng huà shì jì容量:RT5克
CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標簽)624-65-73-錄3-Chloropropyne