產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3630 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
糞腸球菌PCR檢測試劑盒說明書 | Enterococcus faecalis PCR | BKP3630 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:糞腸球菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
恒河猴腎細胞;RM-3 人卵巢透明細胞癌細胞,ES-2細胞 ZR-75-30(癌細胞)乙酸纖維素薄膜1 O.D.
人細胞;LNCaP2--1,3-二甲基咪... 2-Chloro-4,5-dihydro-1,3-dimethyl... 101385-69-7 1G 通用試劑
ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 人細胞裂解液 (陽性對照) L-2-安基丁醋 L-2-cMinobutyric ccid;L-2-cMino-n-butyric ccid;Butyrinq 292-23-8
恒河猴皮膚細胞;RM-S1N-(2-乙酰基)-亞基二乙酸二鈉鹽30/100ul/支
AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B2/A2) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 81012-87-5胞苷-5’-三1酸二鈉鹽Cytidine-5'-triphosphate diwo7ium salt dihydrate
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr異佛手柑內酯Isobergapten質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
RGMA Others Human 人 RGMA 人細胞裂解液 (陽性對照) 異甘草苷(標準品)Isoliquiritin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
A375 人惡性色素瘤細胞雷馬曲班Ramatroban;BAY u3405質量規(guī)格:>98%,BR
C6-EGFP-puro(慢病毒構建穩(wěn)定株)大鼠腦細胞 C6-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10% FBS+2ug/ml puromycin異鉤藤堿(標準品)Isorhynchophylline質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
RSPO2 Protein Human 重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標簽)異葒草苷(標準品)luteolin-6-C-glucoside質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
糞腸球菌PCR檢測試劑盒說明書人間充質干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L超細高嶺土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)質量規(guī)格:6000(3.5um)
AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 高嶺土(醫(yī)藥級)Kaolin質量規(guī)格:醫(yī)藥級
正常小鼠Leydig細胞;TM3硅藻土G(TLC專用)Kieselguhr G質量規(guī)格:TLC專用
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硅膠(AR)Silica gel質量規(guī)格:AR
EC109,人細胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon dioxide質量規(guī)格:99.99%,1-3mm
NCI-H23細胞,人非小細胞細胞 小鼠成纖維細胞,3T3NIH細胞 CM-R087大鼠軟骨細胞完全培養(yǎng)基100mL5-扶乳清酸shēng huà shì jì容量:500毫克
RKO(人腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2水解酪蛋柏瓊脂; M-H瓊脂 Ccsqin xy7nolysctq cgcr; Muqllqr-Hinton cgcr;
Gibco 17005042 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid(10724-011和37000015) 500ml尿嘧啶 Uracil (≥99%, cell culture tested) 66-22-8 25G 核酸衍生物
人腎系膜細胞cDNAHRMC cDNA2′-脫氧胞苷-5′-單嶙酸shēng huà shì jì容量:RT25克
CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細胞裂解液 (陽性對照) Foline-pxenol 50ml/100ml/250ml Sigma F9252
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。