產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3602 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書 | Edwardsiella spp.PCR | BKP3602 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
兔子膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒 7-Oxo-β-sitosterol 2034-74-4 中文名:7-氧代-β-谷甾醇 分子式:C29H48O2
兔子膠原酶I(Collagenase I)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (R,E)-Deca-2-ene-4,6-diyne-1,8-diol 931116-24-4 中文名: 分子式:C10H12O2 度:% 關(guān)鍵詞: 聚乙炔; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒 7-Methoxy-1-tetralinone 中文名: 分子式:C11H12O2 度:98.0%
兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISAKit 7-Methoxy-1-tetralinone 6836-19-7 中文名: 分子式:C11H12O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone 中文名:(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮 分子式:C10H11NO2 度:98.0%
Rosiglitazone maleate 中文名:馬來酸羅格列酮 分子式:C22H23N3O7S 度:98.0% 豚鼠壞死因子αelisa試劑盒 豚鼠壞死因子α試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豚鼠壞死因子α試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠壞死因子α試劑盒、豚鼠壞死因子αeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
Diclofenac 中文名:雙氯芬酸鈉 分子式:C14H10Cl2NNaO2 度:98.0% 豚鼠elisa試劑盒 豚鼠試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豚鼠試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠試劑盒、豚鼠eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
Finasteride 中文名:非那雄胺 分子式:C23H36N2O2 度:98.0% 豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒
N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine 中文名: 分子式:C16H13N5O2 度:98.0% 豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒
Tebipenem pivoxil 中文名:泰比培南酯 分子式:C22H31N3O6S2 度:98.0% 豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒
愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書羥基磷灰石 Hydroxyapatite 質(zhì)量規(guī)格:>99%,粒徑20nm RatPhosphorylatedadenosinemonophosphateactivatedproteinkinase,AMPKELISAKit大鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
羥丙基甲基纖維素(粘度11250-21000mPas) Hydroxy Propyl Methyl Cellulose/HPMC K15M 質(zhì)量規(guī)格:粘度11250-21000mPas GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25
羥丙基甲基纖維素 Hydroxypropylmethylcellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度55 - 60 mPa.s MouseTestoterone,TELISA試劑盒小鼠睪同(T)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
羥丙基甲基纖維素(30000 mpa.s) HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格:30000 mpa.s,BR 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒 ,英文名: PCNA ELISA Kit
羥丙基甲基纖維素(4000mpas) HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度K4m,4000 mpa.s 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA檢測試劑盒Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 96T/48T
麥芽糖;淀粉糖 D-(+)-Maltose monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:>92%,一水物 大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit
ONX-0914 (PR-957) ONX0914;PR957 質(zhì)量規(guī)格:>98%,immunoproteasome抑制劑 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規(guī)格:96T/48T
N-壬?;?/span>-N-甲基葡萄糖胺(MEGA9) N-Nonanoyl-N-methylglucamine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA高分離試劑盒10/20
甲基纖維素(100000mPa.s) Methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度100000mPa.s ELISAKitFT4人游離甲狀腺素規(guī)格:48T/96T
甲基纖維素(4000 mPa.s) Methyl cellulose, middle viscosity 質(zhì)量規(guī)格:4000mPa.s,BR 小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒 ,英文名: AT ELISA Kit
鉤吻素己 HPLC≥98% 20mg ELISAKit8-epi-PGF2α兔8-異構(gòu)素規(guī)格:48T/96T
鉤吻素甲 GC≥98% 20mg ELISAKitA1c人A1c規(guī)格:48T/96T
鉤吻素子 HPLC≥98% 20mg ELISAKitAAV人腺相關(guān)病毒規(guī)格:48T/96T
狗牙花堿D HPLC≥98% 20mg ELISAKitAAV人腺相關(guān)病毒規(guī)格:48T/96T
枸橘苷 HPLC≥98% 20mg ELISAKitABCA1人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1規(guī)格:48T/96T
枸杞多糖 鑒別 500mg ELISAKitABCG2人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2規(guī)格:48T/96T
檸檬酸 HPLC≥98% 200mg ELISAKitABP人雄激素結(jié)合蛋白規(guī)格:48T/96T
枸櫞酸血根堿 HPLC≥98% 20mg ELISAKitAC-1人腺苷酸環(huán)化酶1規(guī)格:48T/96T
構(gòu)樹堿A HPLC≥98% 5mg ELISAKitACA人腎上腺皮質(zhì)抗體規(guī)格:48T/96T
古倫賓 HPLC≥98% 20mg ELISAKitACEⅠ人緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶規(guī)格:48T/96T
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。