產(chǎn)地 | 科研 |
保存條件 | 低溫冷藏 |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | AE0091 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
組織來(lái)源 | 急性單核細(xì)胞白血??;男性 |
細(xì)胞形態(tài) | 懸浮 |
是否是腫瘤細(xì)胞 | 否 |
CAS編號(hào) | |
保質(zhì)期 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
器官來(lái)源 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
免疫類型 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
品系 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
生長(zhǎng)狀態(tài) | 詳見(jiàn)說(shuō)明書 |
物種來(lái)源 | 人 |
包裝規(guī)格 | 1×106 |
純度 | % |
是否進(jìn)口 | 是 |
公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱: 人單核細(xì)胞細(xì)胞直銷
簡(jiǎn)稱:THP-1
種屬:人
來(lái)源:急性單核細(xì)胞;男性
培養(yǎng)基:1640
狀態(tài):懸浮
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
貨號(hào):AE0091
基本特性:
( 1 )組織來(lái)源于正常人肺組織。
( 2 )鑒定:肌動(dòng)蛋白, alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
( 3 )原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
( 4 )每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù): 500000cells/1ml 。
( 5 )肌動(dòng)蛋白, alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
( 6 )不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
使用方法:
收到細(xì)胞人單核細(xì)胞細(xì)胞直銷后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入完全培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)操作:
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶,置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干(切記保持無(wú)菌),4℃冰箱放置,備用。
2、取材:正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥,75%酒精浸泡,無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理:將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS (pH 7.4 )中反復(fù)洗滌,去除外部的血漬,洗滌液澄清,用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞:將縱向剪開(kāi), 內(nèi)膜面向上,無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍,去掉內(nèi)皮細(xì)胞,用1 × PBS (pH 7.4 )洗滌3次。
5、分離中膜:將去掉內(nèi)膜的,繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜,去掉外膜,用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊,加入1 × PBS (pH 7.4 ),轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中,PBS洗滌3次,離心收集沉淀物。
6、消化:在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液,將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化:吸出消化液入新的離心管中,按1:1加入消化終止液,中止酶反應(yīng);余下的組織繼續(xù)加入消化液,消化15min ,重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞:收集中止后的消化液于離心管中,1000 rpm,離心10 min,棄去上清,加入培養(yǎng)液重懸,染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度:調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng):放置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中。
月示胨1克2~8℃,避光 MouseOsteoprotegerinLigand,OPGLELISA試劑盒小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(三羥甲基基) rabbitImmunoglobulinM,IgMELISA試劑盒兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
孔雀綠草酸鹽shēng huà shì jì容量:25克 guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
4-巰基本加醋 4-Mqrccptobqnzoic ccid 1074-36-8 人抵抗素(Resistin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
膠回收kitshēng huà shì jì容量:RT500克 小鼠D-甘油3-免疫試劑盒 Mouse D-glyceraldehyde 3-phosphate ELISA Kit
碳酸氫鈉瓊脂基礎(chǔ)100克 RabbitCollagenaseIELISA試劑盒兔子膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
1068-42-4基胍Aminoguanidinium sulphate Humanai-IgAaibodyELISA試劑盒人抗IgA抗體(ai-IgA-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
1-本基-3-甲基-5-吡唑酮5U2~8℃ Humancalumenin,CALUELISAKit人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
4,4'-氧化偶氮苯 4,4'-Azoxyanisole,98% 1562-94-3 5G 通用試劑 人N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
N,N’-二環(huán)己基碳二亞安 Dicyclohqxylccrbodiimidq 238-72-0 兔載脂蛋白E(Apo-E)免疫試劑盒 Rabbit apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit
鈉培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:RT10克 人C肽(C-Peptide)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1070-89-9六甲基二硅基胺基鈉wo7ium bis(trimetxylsilyl)amide 兔A1c(GHbA1c)免疫試劑盒 Rabbit Glycated hemoglobin A1c,GHbA1c ELISA Kit
磺丁基-β-環(huán)糊精shēng huà shì jì容量:25克 素H2(PGH2)ELISA試劑盒 ,英文名: PGH2 ELISA Kit
異戊醚 Isoamyl ,99% 544-01-4 25ML 通用試劑 RabbitHeatShockProtein90,HSP-90ELISA試劑盒兔熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
哌拉西林鈉/哌芐青霉素鈉/氧青霉素鈉/(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(4-乙基-2,3-二氧代-1-甲?;?/span>)苯乙?;?/span>-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)3.2.0庚烷-2-鈉鹽/Piperacillin sodium salt 生物技術(shù)級(jí),770ug/mg, 1/5克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 Humanai-perinuclearfactor,APFELISA試劑盒人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人單核細(xì)胞細(xì)胞直銷茴香腦shēng huà shì jì容量:100克 Humanai-glycoproteinaibody,GPELISA試劑盒人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2390-54-7硫代黃色素TThioflavine T Humancadherln-relatedneuronalreceptor1,C-1ELISAKit人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(C-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鎳NTA瓊脂糖凝膠6FFshēng huà shì jì容量:100毫克 人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
3,3,5,5-四二苯二... Bis(3,5-dichlorophenyl) disulfide,97% 137897-99-5 5G 通用試劑 兔子Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒 Rabbit cross linked C-telopeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
3.4-二輕 Dixy7nopyrcn 110-87- 去甲(NE)ELISA試劑盒 ,英文名: NE ELISA Kit
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。