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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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鱖魚脾腎壞死病毒(ISKNV)PCR檢測方法(熒光-PCR法)
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:BK-P63977
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2024-11-22
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BK-P63977
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進口

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

鱖魚脾腎壞死病毒(ISKNV)PCR檢測方法(熒光-PCR)

50T

BK-P63977

異常漢遜酵母變種   石蕊殺菌素鏈霉菌 Streptomyces litmocidini
嗜熱脂肪地芽孢桿菌   淺灰鏈霉菌 Streptomyces griseolus
銅綠假單胞菌CMCC10104凍干粉   蘇云金芽胞桿菌亞毒亞種 Bacillus thuringiensis subsp. subtoxicus
間型酒香酵母   香菇
肉葡萄球菌   島青霉
異型酒香酵母   銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)
 葡萄芽假絲酵母
實驗方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl
引物110pM
2 μl
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl
ddH2O 50 μl

PCR實驗步驟:
取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2
、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2.
標記 6 個離心管,分別為 76,5,4,3,2
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

小鼠心肽(ANP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Metamizole 中文名:安乃近 分子式:C13H16N3NaO4S

小鼠心肽(ANP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Mesterolone 中文名:甲氫 分子式:C20H32O2 度:98.0%

小鼠心素(mouse ANP) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 Mestanolone 中文名:美雄諾龍 分子式:C20H32O2 度:98.0%

小鼠心素 英文名稱: aialnaiureticpeptide 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ANP  Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  139481-28-0 中文名: 分子式:C22H17N3O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:

小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Metamizole   68-89-3 中文名:安乃近 分子式:C13H16N3NaO4S 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
C127 小鼠細胞 102(>97.0%(HPLC)(N))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(HPLC)(N)Coumarin 102

FCGR3A Others Human  CD16a / FCGR3A 細胞裂解液 (陽性對照)  314(>98.0%(HPLC)(N))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)Coumarin 314

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化)異環(huán)1酰胺質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng)Ifosfamide

IL10RB Others Mouse 小鼠 IL10RB / IL10R2 細胞裂解液 (陽性對照) 異環(huán)1酰胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Ifosfamide

KYSE450 鹽酸普拉克索質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.8Pramipexole 2HCL monohydrate
XCL1 Protein Mouse 重組小鼠 XCL1 蛋白 (His 標簽)羅漢樹脂酚-4'-O-β-龍膽二糖苷(標準品)Matairesinol 4'-O-β-gentiobioside質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品

RBE(細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IFNA5 / IFNaG 細胞裂解液 (陽性對照) 石蕊Litmus質(zhì)量規(guī)格:AR

小細胞細胞;NCI-H2097-O-甲基蘆薈新甙A(標準品)7-O-Methylaloeresin A質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品

PTGFRN Others Cynomolgus 食蟹猴 EWI-F / PTGFRN 細胞裂解液 (陽性對照) 肉蓯蓉苷A(標準品)Cistanoside A質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品

CL-0449SW 780(膀胱移行細胞癌)5×106cells/瓶×2蘆薈新甙D(標準品)Aloeresin D質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品
Zolpidem    中文名:坦 分子式:C19H21N3O 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠卵泡休止素 英文名稱: Mouse Follistatin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FST

Zolmitriptan  139264-17-8  中文名:佐米曲普坦 分子式:C16H21N3O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠叉頭框蛋白O3 英文名稱: Mouse Forkhead Box protein O3 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FOXO3

Zileuton  111406-87-2  中文名:齊留通 分子式:C11H12N2O2S 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠脂肪甘油三酯酯酶(ATGLELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Zidovudine  30516-87-1  中文名:齊多夫定 分子式:C10H13N5O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠脂多糖(LPSELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Xanthorin  17526-15-7  中文名: 分子式:C16H12O6 度:% 關(guān)鍵詞: 抗菌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

實驗注意事項:
1
RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
鱖魚脾腎壞死病毒(ISKNV)PCR檢測方法(熒光-PCR法)實時熒光定量PCRquantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR


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