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M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞

起訂量 (瓶)價(jià)格

1-10￥2350 /瓶

≥10￥1250 /瓶

品牌：帛科

產(chǎn)地：進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

貨號(hào)：BK-G63291

發(fā)布日期： 2021-02-21
更新日期： 2024-11-22

發(fā)送咨詢信息

產(chǎn)品詳請(qǐng)

產(chǎn)地	進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件	低溫冷藏
品牌	帛科
貨號(hào)	BK-G63291
用途	產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞形態(tài)	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
是否是腫瘤細(xì)胞	否
CAS編號(hào)
保質(zhì)期	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
器官來(lái)源	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
免疫類型	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
品系	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
生長(zhǎng)狀態(tài)	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
物種來(lái)源	詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
包裝規(guī)格	100ul10 100ul50
純度	%
是否進(jìn)口	是

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：100ul*10 100ul*50
分類：表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀）干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

注意事項(xiàng)：

1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽(yáng)性對(duì)照）能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒(méi)長(zhǎng)出來(lái)，重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問(wèn)這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過(guò)關(guān)，還是連接出了問(wèn)題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問(wèn)題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過(guò)程中沒(méi)有發(fā)生凍融的情況，是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

粘酸(>98%，BC)Mucic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 96T/48T ELISAKitOH小鼠25羥基維生素D3規(guī)格：48T/96T

碲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml，基體:HCI)Tellurium standard質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml，基體:HCI 人衣原體抗體(Cpn-Ab)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-Ab ELISA Kit ChickenIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKit雞β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

銩標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體：10%HCL)Thulium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mL,基體：10%HCL RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒組裝/原裝

釩標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：水)Vanadium standard質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水 COLLAGENII蛋白共沉淀分析試劑盒5 小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)試劑盒 Mouse cholest erolester ansfer protein,CETP ELISA Kit

Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISA試劑盒人β血小板球蛋白/β環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 136849-88-2灰氈毛忍冬皂苷乙品牌 Macranthoidin B

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISA試劑盒，英文名： TGF-α ELISA Kit 16830-15-2積雪草苷規(guī)格 Asiaticoside

小鼠糖原1酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit 96T/48T 464-92-6積雪草酸 Asiatic acid

人抗SSB/La抗體試劑盒 Human ai-SSB/La aibody ELISA Kit 6902-91-6吉馬酮說(shuō)明書(shū) Germacrone

Rabbitβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit兔子β血小板球蛋白/β環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 357-70-0加蘭他敏品牌 Galanthamine

557-61-9二十八烷醇說(shuō)明書(shū) Octacosanol 豬血漿激肽釋放酶(KLKB1)試劑盒 Pig plasma kallikrein,KLKB1 ELISA Kit

55750-84-0西紅花苷II說(shuō)明書(shū) Crocin II 豬血紅蛋白(Hb)試劑盒 Pig hemoglobin,Hb ELISA Kit

55576-66-4仙鶴草酚B規(guī)格 Agrimol B 豬性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 Pig von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit

555-66-86-姜烯酚 6-Shogaol 豬舒緩激肽(BK)試劑盒 Pig Bradykinin,BK ELISA Kit

55481-88-4大葉茜草素規(guī)格 Rubimaillin 豬生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T

M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞操作方法：

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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