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Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞

起訂量 (瓶)價(jià)格

1-10￥2350 /瓶

≥10￥1250 /瓶

品牌：帛科

產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)

貨號：BK-G63231

發(fā)布日期： 2021-02-21
更新日期： 2024-11-22

發(fā)送咨詢信息

產(chǎn)品詳請

產(chǎn)地	進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件	低溫冷藏
品牌	帛科
貨號	BK-G63231
用途	產(chǎn)品僅用于科研
組織來源	詳見說明書
細(xì)胞形態(tài)	詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞	否
CAS編號
保質(zhì)期	詳見說明書
器官來源	詳見說明書
免疫類型	詳見說明書
品系	詳見說明書
生長狀態(tài)	詳見說明書
物種來源	詳見說明書
包裝規(guī)格	100ul10 100ul50
純度	%
是否進(jìn)口	是

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：100ul*10 100ul*50
分類：克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀）干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒長出來，重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過長，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

棕櫚酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)Methyl palmitate HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISA試劑盒人擴(kuò)張性突變基因(ATM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 綿羊白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒組裝/原裝

亞麻酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Methyl linolenate 植物源性食品小麥(wheat)試劑盒20 人脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)試劑盒 Human Adipose iglyceride Lipase,ATGL ELISA kit

十一酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Methyl undecanoate Humahrombusprecursorprotein,TpPELISAKit人前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 細(xì)胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒，英文名： LFA-2/CD2 ELISA Kit

分子篩, 5 ?(pellets, 2.5-3.5 mm)質(zhì)量規(guī)格：pellets, 2.5-3.5 mmMolecular sieves, 5 ? 小鼠蛋酸酶3調(diào)節(jié)因子亞基1(PPP3R1)ELISA試劑盒，英文名： PPP3R1 ELISA Kit Ratcarnitine-acylcarnitineanslocase,CACTELISA試劑盒大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISA試劑盒大鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 64439-81-210-羥基喜樹堿品牌 10-Hydroxycamptothecin

小鼠組織蛋白酶S(CTSS)ELISA試劑盒，英文名： CTSS ELISA Kit 13-去羥基印烏堿規(guī)格 13-Dehydroxyindaconintine

綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T 473-08-*-香附酮 α-Cyperone

犬樣因子3(INSL3)試劑盒 Dog insulin-like 3,INSL3 ELISA Kit 50-99-7D-無水葡萄糖說明書 D(+)-Glucose

英文名稱MouseApelin-12ELISAKIT小鼠Apelin-12規(guī)格：96T/48T 10284-63-6D-松醇品牌 D-Pinitol

96553-02-5絲石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯說明書 gypsogenin-3-O-β-D-gluco pyranoside 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)活性熒光定量檢測試劑盒20

96315-53-6虎掌草皂甙D品牌 Huzhangoside D 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)活性比色法定量檢測試劑盒20

Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞961-29-5異甘草素品牌 Isoliquiritigenin 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-8)活性比色法定量檢測試劑盒20

961-29-5異甘草素規(guī)格 Isoliquiritigenin 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7)活性比色法定量檢測試劑盒20

960383-96-4鹽酸藥根堿 Jatrorrhizine 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性熒光定量檢測試劑盒20

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