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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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XL10-Gold 電擊感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-102350 /瓶
≥101250 /瓶
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-G63227
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2024-11-22
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) BK-G63227
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞形態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
是否是腫瘤細(xì)胞
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
器官來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
免疫類(lèi)型 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
品系 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
物種來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
包裝規(guī)格 50ul*5 50ul*20
純度 %
是否進(jìn)口
規(guī)格參數(shù):

產(chǎn)品名稱:XL10-Gold 電擊感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 :50ul*5 50ul*20
分類(lèi):克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
儲(chǔ)存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng):
1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽(yáng)性對(duì)照)能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒(méi)長(zhǎng)出來(lái),重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問(wèn)這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過(guò)關(guān),還是連接出了問(wèn)題?哪個(gè)可能性大些?
答:應(yīng)該是連接的問(wèn)題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
答:如-80冰箱儲(chǔ)存過(guò)程中沒(méi)有發(fā)生凍融的情況,是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法:
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

組胺二鹽酸-α,α,β,β-d4質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Histamine-α,α,β,β-d4 Di  人骨堿性1酸酶(BALP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanbonealkalinephosphatase,BALPELISAKit 96T/48T  石蠟切片神經(jīng)纖維銀染試劑盒50

R(-)-α-甲基組胺二鹽酸質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口R(-)-α-Methylhistamine Di  大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)試劑盒 Rat ierferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit  ELISAKitNMP-22人核基質(zhì)蛋白22規(guī)格:48T/96T

酸卡巴拉汀- 標(biāo)記d4質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Rivastigmine Tartrate - Labeled d4  CLIAKitforVB6(MouseVitaminB6)ELISAKit小鼠維生素B6規(guī)格:48T/96T  大鼠胃動(dòng)素受體(MTLR)ELISA試劑盒 ,英文名: MTLR ELISA Kit

根皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Phlorizin  明膠法大鼠胚胎干細(xì)胞繁殖試劑盒10  人核心抗體(HBcAb)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanai-hepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit 96T/48T

rabbitthyroxine,T4ELISAKit兔子甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  14937-32-71,2,3,4,6-O-五沒(méi)食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose

載玻片細(xì)胞CDK6蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  1241-87-81-咖啡??鼘幩嵋?guī)格  1-caffeoylquinic acid

Humanβai-galactanproteinsIgGELISA試劑盒人β乳糖蛋白抗體IgGELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  1182-34-91,3-二咖啡酰奎寧酸  Cynarin

小鼠組織蛋白去乙?;?/span>2(Hdac2/Yy1bp)ELISA試劑盒 ,英文名: Hdac2/Yy1bp ELISA Kit  30964-13-71,5-二咖啡??鼘幩嵴f(shuō)明書(shū)  1,5-Dicaffeoylquinic acid

小鼠凝血酶受體()ELISA檢測(cè)試劑盒Mousethrombieceptor,ELISAKit 96T/48T  86632-03-33,4,5-三咖啡??鼘幩崞放? 3,4,5-Tricaffeoylquinic acid

查斯曼林規(guī)格  Chasmanine   組織氯霉素乙?;D(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因活性同位素定量檢測(cè)試劑盒20

表大戟二烯醇規(guī)格  Tirucallol   組織氯霉素乙?;D(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因活性同位素薄層色譜(TLC)檢測(cè)試劑盒20

XL10-Gold 電擊感受態(tài)細(xì)胞白花前胡丁素  Praeruptorin D   組織絡(luò)氨酸1酸酶(TP)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

白花前胡丙素規(guī)格  +-Praeruptorin C   組織絡(luò)氨酸1酸酶(TP)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷說(shuō)明書(shū)  α-spinasteryl-3-O-β-D-glucoside   組織硫酸酶(rhodanase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

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