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TOP10 感受態(tài)細(xì)胞

起訂量 (瓶)價(jià)格

1-10￥2350 /瓶

≥10￥1250 /瓶

品牌：帛科

產(chǎn)地：進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

貨號(hào)：BK-G63216

發(fā)布日期： 2021-02-21
更新日期： 2024-11-22

發(fā)送咨詢信息

產(chǎn)品詳請(qǐng)

產(chǎn)地	進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件	低溫冷藏
品牌	帛科
貨號(hào)	BK-G63216
用途	產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源	詳見說(shuō)明書
細(xì)胞形態(tài)	詳見說(shuō)明書
是否是腫瘤細(xì)胞	否
CAS編號(hào)
保質(zhì)期	詳見說(shuō)明書
器官來(lái)源	詳見說(shuō)明書
免疫類型	詳見說(shuō)明書
品系	詳見說(shuō)明書
生長(zhǎng)狀態(tài)	詳見說(shuō)明書
物種來(lái)源	詳見說(shuō)明書
包裝規(guī)格	100ul20 100ul100
純度	%
是否進(jìn)口	是

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：TOP10 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：100ul*20 100ul*100
分類：克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀）干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

注意事項(xiàng)：

1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽(yáng)性對(duì)照）能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒長(zhǎng)出來(lái)，重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

左氧氟沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Levofloxacin Hemihidrated質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Humanheparansulfate,HSELISAKit 人硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒組裝/原裝

四氫生物蝶呤(THB)二鹽酸Tetrahydrobiopterin (THB) di質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISA試劑盒紅螯光殼螯蝦卵黃脂1蛋白/卵黃1蛋白(Lv/Vn)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 小鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒 Mouse iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit

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鹽酸決奈達(dá)隆-d6Dronedarone-d6 HCl質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 MouseIgMELISAKit小鼠IgMELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T HumanSerumamyloidP,SAPELISA試劑盒人血清淀粉樣蛋白P(SAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 43043-74-9去氧紫草素 Deoxyshikonin

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Humanα-Synuclein,α-SYNELISA試劑盒人α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 24063-71-6異莪術(shù)烯醇品牌 Isocurcumenol

小鼠組織因子通道抑制因子(TFPI)ELISA試劑盒，英文名： TFPI ELISA Kit 952068-64-3巴利森苷D規(guī)格 Parishin D

塔拉薩敏 talatisamine 組織腎素(renin)熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒20

薯蕷皂苷元-3-O-β-D-木糖-(1→3)-β-D-葡萄糖苷品牌 diosgenin-3-O-β-D-xylosyl-(1→3)-β-glucoside 組織腎素(renin)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

山麥冬皂苷B品牌 Liriopesides B 組織砷元素比色法定量檢測(cè)試劑盒20

TOP10 感受態(tài)細(xì)胞三七總皂苷規(guī)格 Panax notoginsenosides 組織傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphi)定性試劑盒20

三七皂苷R2(R型) R-Notoginsenoside R2 組織傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphi)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

操作方法：

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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