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實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

4. 細(xì)胞系統(tǒng)避蚊胺(99%)DEET質(zhì)量規(guī)格：0.99

CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2特丁通(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbumeton質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠外膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL噻呋酰胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Thifluzamide質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%

4T1 小鼠癌細(xì)胞(標(biāo)準(zhǔn)品)Tsumacide質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 特丁津(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbuthylazine質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
TALL-104細(xì)胞，急性T細(xì)胞細(xì)胞 KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株,G422細(xì)胞 成纖維細(xì)胞裂解物HLFL2-甲氧基-d3-17β-雌二醇2-Methoxy-d3-17β-estradiol質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

NCI-H2170(肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23-O-甲基雌二醇-d33-O-Methyl Estradiol-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

Calu-1(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0054Calu-3()5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA3174-甲氧基-[13C,2H3]-雌激素酮4-Methoxy-[13C,2H3]-estrone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

家貓腎細(xì)胞;CATK1雌激素酮-2,4,16,16-d4 3-硫酸鈉鹽Estrone-2,4,16,16-d4 3-sulfate  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

TSPAN1 Others Human  TSPAN1 (aa 110-211) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-羥基雌激素酮2-Hydroxy Estrone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S4土大黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Rhapontin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

HEC-1A, 內(nèi)膜癌細(xì)胞系鹽酸苯海索（標(biāo)準(zhǔn)品）Benzhexol 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

細(xì)胞;SF126 大鼠*導(dǎo)管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL葉酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Folic acid質(zhì)量規(guī)格：含量測定

食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)葡萄糖酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)Calcium gluconate質(zhì)量規(guī)格：檢查

SIGLEC5 Others Human  SIGLEC5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雙羥萘酸噻嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）Pyrantel pamoate質(zhì)量規(guī)格：含量測定
HLF-a(人肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌胺藍(lán)Oshēng huà shì jì容量：2～8°C1克

管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,3-二氧基本全 2,3-Dimqthoxybqnzcldqhydq 86-21-1

FGF2 Others Human 人 VEGF121 / VEGF-A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 炭疽桿菌shēng huà shì jì容量：1米

人非小細(xì)胞;NCI-H2087霧抑制劑shēng huà shì jì容量：2～8℃1毫克

CCD-1095Sk細(xì)胞，皮膚細(xì)胞 人細(xì)胞,HHCC細(xì)胞 CL-0176OP9(小鼠*基質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×252092-43-02-溴-4-硝基 N-氧，97%2-Bromo-4-nitnopyridine 1-oxide

人病毒7型PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。