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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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三日PCR檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-P63537
  • 價(jià)格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-11-27
  • 更新日期: 2024-11-22
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
品牌 帛科
貨號(hào) BK-P63537
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 %
CAS編號(hào)
是否進(jìn)口

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

三日PCR檢測(cè)試劑盒(熒光PCR)

50T

BK-P63537

實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix
2mM 
4 μl     
引物110pM 
2 μl     
引物210pM 
2 μl     Taq
酶 (2U/μl 
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl 
1 μl     
ddH2O 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2
、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,43,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25  2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile  865758-96-9  中文名:  分子式:C13H10ClN3O2  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

線粒體復(fù)合物I蛋白共沉淀分析試劑盒5  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  中文名:  分子式:C12H14O3S  度:98.0%

線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25  22-Dehydroclerosteryl acetate  中文名:  分子式:C31H48O2  度:93.0%

線粒體復(fù)合物IV蛋白共沉淀分析試劑盒5  2-Acetonaphthone  中文名:2'-萘乙酮  分子式:C12H10O  度:98.0%

線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25  2-Allylphenol  中文名:2-烯丙基酚  分子式:C9H10O  度:98.0%
CA4 Others Human  CA4 / Car4 / CAIV 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DAABD-Cl [=4-[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7--2,1,3-苯并惡二唑質(zhì)量規(guī)格:用于蛋白質(zhì)組分析,用于高效液相色譜標(biāo)記,熒光染料,用于質(zhì)譜的衍生化試劑DAABD-Cl [=4-[2-(Dimethylamino)ethylaminosulfonyl]-7-chloro-2,1,3-benzoxadiazole]

大額牛肺細(xì)胞;BFR-L12,3-萘二醛(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)2,3-Naphthalenedialdehyde

LAIR2 Others Human  LAIR2 / CD306 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 溴鄰苯三酚紅質(zhì)量規(guī)格:INDBromopyrogallol red

HSC 細(xì)胞鹽酸副品紅質(zhì)量規(guī)格:BS,用于生物學(xué)染色Basic Fuchsin

J82膀胱移行細(xì)胞癌 J82 human bladder ansitional cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS燦爛黃質(zhì)量規(guī)格:INDBrilliant Yellow
FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 利福布?。?biāo)準(zhǔn)品)Rifabutin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品

基質(zhì)細(xì)胞總RNAHHGMC NA利福噴丁Rifapentine質(zhì)量規(guī)格:>97%

EFNA5 Others Canine 狗 Ephrin-A5 / EFNA5 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 利福噴丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Rifapentine質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定

二氫葉酸還原酶缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr-利魯唑Riluzole質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

SW1990細(xì)胞,*癌細(xì)胞 胸膜瘤細(xì)胞,SMC-1細(xì)胞 雜交瘤(B);Z51B3C10H12A12G2F7E7利魯唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Riluzole質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
L-Aspartic acid  中文名:L-天門冬氨酸  分子式:C4H7NO4  度:98.0%  小鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride  中文名:3,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐  分子式:C17H6O7  度:98.0%  小鼠白介素18(IL-18)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

1,2-Benzisothiazolin-3-one  中文名:1,2-苯并異噻唑-3-  分子式:C7H5NOS  度:98.0%  人凝血酶(TM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzoin methyl ether  中文名:安息香甲基醚  分子式:C15H14O2  度:98.0%  人凝血因子Ⅶ(F)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzanthrone  中文名:苯并蒽酮  分子式:C17H10O  度:98.0%  人可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1
RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCRquantitative real-time PCRqPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對(duì)定量)和定性分析。
三日PCR檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

聯(lián)系方式
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