產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BK-P63403 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50T |
純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)% |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
??刹《?span> 11 型PCR檢測(cè)試劑盒 (熒光PCR法) |
50T |
BK-P63403 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
??刹《?nbsp;11 型PCR檢測(cè)試劑盒 (熒光PCR法)6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1αelisa試劑盒 兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒、兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 7α-Hydroxysitosterol 34427-61-7 中文名:7α-羥基谷甾醇 分子式:C29H50O2 度:95.0% 關(guān)鍵詞: 甘蔗; 菠蘿; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (S)-4-(4-Aminobenzyl)-2(1H)-oxazolidinone 152305-23-2 中文名:(s)-4-(4-氨基芐基)-1,3-噁唑烷-2-酮 分子式:C10H12N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 7-Oxo-β-sitosterol 2034-74-4 中文名:7-氧代-β-谷甾醇 分子式:C29H48O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 抗; 松屬; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISAKit ELISA. 96T/48T 7α-Hydroxystigmasterol 中文名:7α-羥基豆甾醇 分子式:C29H48O2 度:%
兔子膠原酶II(Collagenase II)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
(S)-(-)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol 中文名:(S)-(-)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇 分子式:C17H21NO 度:99.0%
胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-2萊苞迪甙C(標(biāo)準(zhǔn)品)Rebaudioside C質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠*瘤細(xì)胞;IR983F 腺癌細(xì)胞,Caco-2細(xì)胞 WEHI 164細(xì)胞,鼠纖維細(xì)胞系D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸(R)-(?)-Mandelic acid質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
GBC-SD, 細(xì)胞 Human1-氨基海因鹽酸鹽;AHD,1-氨基乙內(nèi)酰脲鹽酸鹽1-Aminohydantoin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-氨基海因鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)1-Aminohydantoin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
尿道上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)促腎上腺皮質(zhì)激素(1-24),替可克肽ACTH (1-24), human質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CNE-1 高分化細(xì)胞參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rb1質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
P9-EGFP-puro小鼠*基質(zhì)細(xì)胞 P9-EGFP-puro mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS+1%P/S參皂苷Rb2(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rb2質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rb3質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
心肌細(xì)胞 (HCMa) (1×106 ) RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 Mouse參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rc質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠T細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rd質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3-Aminoadamantan-1-ol 中文名: 分子式:C10H17NO 度:98.0% DeoxycholicAcid,Salt 50g
Raltegravir 中文名:雷特格韋 分子式:C20H21FN6O5 度:98.0% 焦碳酸二乙脂 10ml
Vildagliptin 中文名:維達(dá)列汀 分子式:C17H25N3O2 度:98.0% DEPC 100ml
1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile 中文名: 分子式:C7H9ClN2O 度:98.0% 豚鼠組胺elisa試劑盒 豚鼠組胺試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豚鼠組胺試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠組胺試劑盒、豚鼠組胺eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
Loratadine 中文名:氯雷他定 分子式:C22H23ClN2O2 度:98.0% 豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1elisa試劑盒 豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒、豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative
real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR