產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4431 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
塔那痘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Tanapox Virus(TPV)PCR | BKP4431 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:塔那痘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Amitriptyline 中文名:鹽酸阿米替林 分子式:C20H24ClN (NO)測定試劑盒(還原酶法)
Amitraz 中文名:雙甲瞇 分子式:C19H23N3 ATP酶測試盒(測普通組織勻漿的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,樣本前處理不需高速離心)
Amisulpride 中文名:阿米舒必利 分子式:C17H27N3O4S 總脂酶檢測 Liver / muscle glycogen detection
Amiodarone 中文名:鹽酸胺酮 分子式:C25H30ClI2NO3 肝脂酶/脂蛋白脂酶檢測 Lipofuscin (excluding colorimeic detection)
Aminophylline 中文名:氨茶堿 分子式:C16H24N10O4 肝/肌糖元檢測 Lipofuscin (including colorimeic detection)
兔子皮質(zhì)/上腺(CO)ELISAKit ELISA. 96T/48T 9-Hydroxy-4-androstene-3,17-dione 中文名:9-羥基-4-雄甾烯-3,17-二酮 分子式:C19H26O3
兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 9,16-Dioxo-10,12,14-octadecatrienoic acid 中文名: 分子式:C18H26O4 度:%
兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 9,10-Bis(3,5-dihydroxyphenyl)anthracene 中文名:9,10-雙(3,5-二羥苯基)蒽 分子式:C26H18O4 度:98.0%
兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene 中文名:9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴 分子式:C27H24N2 度:98.0%
兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit ELISA. 96T/48T 9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene 107934-60-1 中文名:9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴 分子式:C27H24N2 度:98.0%
塔那痘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)JAR細(xì)胞,胚絨毛癌細(xì)胞 人,LTPEP-a-2細(xì)胞 KM3, 人細(xì)胞2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2'-O-Methyladenosine
貓腎細(xì)胞;F81D-纈氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRD-Valine
TNFSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BBL / TNFSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2'-脫氧鳥苷-3'-單1酸二鈉質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt
CL-0395NCI-H2227(人小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N-乙酰-DL-甲硫氨酸質(zhì)量規(guī)格:0.99N-Acetyl-DL-mine
CADM3 Others Rat 大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) DL-高半胱氨酸質(zhì)量規(guī)格:0.95DL-Homocysteine
Hep G2(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-α-環(huán)糊精水合物(>90.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(HPLC)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-α-cyclodextrin Hydrate
ACY1 Others Mouse 小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-γ-環(huán)糊精水合物(>95.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-γ-cyclodextrin Hydrate
人成纖維細(xì)胞總RNAHCF NA6-O-α-D-麥芽糖基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)6-O-α-D-Maltosyl-β-cyclodextrin
CROT Others Human 人 CROT (474 Leu/Val) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 三甲基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)Trimethyl-β-cyclodextrin
敘利亞倉鼠肌肉細(xì)胞;GH-M13,5-雙[3,5-雙(芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(HPLC)3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。