產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4335 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
柯拉松血吸蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Schistosoma curassoniPCR | BKP4335 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:柯拉松血吸蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
5-Benzyl-1H-tetrazole 18489-25-3 中文名:5-芐基-1H-四唑 分子式:C8H8N4O 計(jì)數(shù)液 Alkaline phosphatase stain
Benzyl 4-hydroxybenzoate 94-18-8 中文名:4-羥基苯甲酸芐酯 分子式:C14H12O3 Acid phosphatase stain
(-)-Noe's Reagent 108031-79-4 中文名:(-)-核歐沃豪斯效應(yīng)試劑 分子式:C24H38O3 定性測試盒 Acid esterase stain
2,2-Bis(4-chloroformyloxyphenyl)propane 2024-88-6 中文名:2,2-雙(4-氯甲酰氧苯基)丙烷 分子式:C17H14Cl2O4 嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP)核酸檢測試劑盒 48T
3,6-Bis(hydroxymethyl)durene 7522-62-5 中文名:3,6-雙(羥甲基)杜烯 分子式:C12H18O2 綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
兔p物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide 83846-85-9 中文名:4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚 分子式:C20H16OS 度:98.0%
兔p物質(zhì)(SP)ELISAKit ELISA. 96T/48T 5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile 中文名: 分子式:C7H5ClN2O2
兔p53(p53)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide 83846-85-9 中文名:4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚 分子式:C20H16OS
兔p53(p53)ELISAKit ELISA. 96T/48T 5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde 231278-84-5 中文名: 分子式:C26H17ClFN3O3
兔I型膠原(rabbit Collagen I) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Aza-*ndrostan-1-ene- 3-one-17carboxylic acid 140700-63-6 中文名: 分子式:C19H27NO3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
柯拉松血吸蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)OLFM4 Others Human 人 OLFM4 / Olfactomedin-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 氘代DMSO-D6(0.6ml x 10 )質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%Dimethyl Sulfoxide-D6
CM-H053人細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL氘代DMSO-D6(10 g )質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%Dimethyl Sulfoxide-D6
DIRAS3 Others Human 人 ARHI / DIRAS3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 蛋白酶K(進(jìn)分)質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma分裝Proteinase K
人海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-h蛋白酶K(Sigma)質(zhì)量規(guī)格:≥30units/mg protein,sigma原裝Proteinase K
Hs 181.Tes細(xì)胞,正常人細(xì)胞 人癌細(xì)胞,HCC1937細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM-sf胰凝乳蛋白酶抑制劑質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分Chymostatin
人脂肪微內(nèi)皮細(xì)胞HAMEC抗壞血酸;維生素C質(zhì)量規(guī)格:AR;>99%Ascorbic acid;vitamin C
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 維生素C(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Ascorbic acid;vitamin C
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO十八胺; 十八烷基胺; 硬脂胺質(zhì)量規(guī)格:AROctadecanamine
NCI-H157細(xì)胞,人非小細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,S-180細(xì)胞 CM-R039大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL山梨酸質(zhì)量規(guī)格:AR,99%Sorbic acid
RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2DL-薄荷醇質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品DL-Menthol
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。