產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4110 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鄂木斯克出病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Omsk Hemorrhagic Fever Virus(OHFV)RTPCR | BKP4110 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:鄂木斯克出病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
人羊膜細胞;WISH二水合乙二酸,英文名或英文縮寫:Oxalic acid dihydrate,級別:CP,98.5%,規(guī)格:1公斤
2V6.11細胞,人胚腎細胞 小鼠細胞,P3X63Ag8.653細胞 CL-0405NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×28-壬1醋 97% 8-NONqNOIC cCID 3164-67-8
CNE-2Z(人細胞) 5×106cells/瓶×2乙酸鎘二水合物,英文名或英文縮寫:Cadmium acetate dihydrate,級別:CP,98%,規(guī)格:25克
hMNC-CB-c single donorula-pure 臍帶血來源的人類單核細胞 人腎小管上皮細胞HRPTEpiC加拿大樹膠shēng huà shì jì容量:100克
T739小鼠肺腺株;LA795SafraninO 5g/10g/50g/100g原裝 Sigma S2255
ACVR1 Others Mouse 小鼠 ALK-2 / ACVR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 頭孢噻呋鈉Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基MM-prf頭孢噻呋鈉(標準品)Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
HA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 5'-三1酸胞苷二鈉鹽(二水)Cytidine-5'-triphosphate(CTP) di salt dihydrate質(zhì)量規(guī)格:>97%,分子生物學級
大鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL伏格列波糖Voglibose質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
H-4-IL-E 大鼠肝細胞瘤細胞 H-4-IL-E hepatoma cells of rats MEM90%(內(nèi)2mM Glutamin)+10%胎牛血清,補加非必須氨基酸(100x)伏格列波糖(標準品)Voglibose質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
鄂木斯克出病毒PCR檢測試劑盒說明書人絨癌細胞;JEG-3 大鼠腸粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL帕拉米韋三水合物Peramivir Trihydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
腦動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)神經(jīng)保護劑NXY059NXY-059,Cerovive質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
CN2 Others Mouse 小鼠 Coactin 2 / CN2 人細胞裂解液 (陽性對照) APMSF(進分)p-APMSF, Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:進分,sigma A6664
大鼠主動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 (1R,2S)-(+)-cis-1-Amino-2-indanol質(zhì)量規(guī)格:0.98
PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12 (high differeiation) rat pheochromocytoma cells (high differeiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSN-BOC-D-色氨醇N-Boc-D-tryptophanol 質(zhì)量規(guī)格:BR,>98%
TNFSF11 Protein Human 重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)SALICYLICACID水楊酸鈉*100G54-21-6RT
大鼠神經(jīng)質(zhì)細胞(RNsn)(1×106) BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株 Human錄化鉍 Bismuth trichloridq 7787-60-
人胚腎細胞;293 [HEK-293]AIBI偶氮二異基咪唑啉鹽酸鹽500毫克AR
IL1R2 Others Mouse 小鼠 IL1R2 / CD121b 人細胞裂解液 (陽性對照) TRIS-GLYCInepUFFER,10XSOLUTIONTris-甘酸緩沖液蛋白組學級1LCOLD
人腎動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL(多效唑)