產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4118 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
細刺奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書 | Ostertagia leptospicularisPCR | BKP4118 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:細刺奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人細胞裂解液 (陽性對照) TRYPSIN胰蛋白酶美國藥典級白色結晶粉末FROZENsigma
猴腎細胞;Vero IgCD410-羌基癸醋 10-xy7noxydqccnoic ccid 1679-23-4
NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人細胞裂解液 (陽性對照) 本碳醋酯 MqTHYL PHqNYL ccroncTq 13209-7-8
中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mLMOPSOwo7iumSALTMOPSO, Na生物技術級白色粉末RTsigma
HGC-27人細胞(未分化) HGC-27 human gasic carcinoma cells (undiffereiated) RPMI-1640(GIBCO)+20%FBS87199-17-54-甲酰本硼酸4-Formylpxenylboronic acid
A431 人表皮癌細胞銀標準溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)Silver standard質量規(guī)格:100μg/mL,基體:1%HNO3
PLC/PRF/5人亞力山大細胞 PLC/PRF/5 human hepatoma cell Alexander MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS鈧標準溶液(1000μg/mL,基體:10%HCL)Scandium standard質量規(guī)格:1000μg/mL,基體:10%HCL
RSPO3 Protein Human 重組人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 標簽)釤標準溶液(1000μg/ml)Samarium standard質量規(guī)格:1000μg/ml
人骨骼肌細胞 (HSkMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 Mouse錫標準溶液(1000μg/ml)Tin standard質量規(guī)格:1000μg/ml
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A錫標準溶液(100μg/mL,基體: 10%HCl)Tin standard質量規(guī)格:100μg/mL,基體: 10%HCl
細刺奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書綠色熒光蛋白標記小鼠前細胞;MFC-GFP激素釋放激素相關蛋白(1-13),人Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human質量規(guī)格:>95%,BR
HL-7702細胞,人肝細胞正常 人干細胞因子單克隆抗體細胞株,AMS2細胞 敘利亞倉鼠皮膚細胞;GH-S1海沙瑞林Hexarelin質量規(guī)格:>95%,BR
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞) 5×106cells/瓶×2組胺素5Histatin 5質量規(guī)格:>95%,BR
Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質細胞生長培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml惡性因子(1-34)酰胺,人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human質量規(guī)格:>95%,BR
人角膜細胞HK惡性因子(1-34), 人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human質量規(guī)格:>95%,BR
CM-H026人內皮細胞完全培養(yǎng)基100mL疏水硅烷shēng huà shì jì容量:保存:-20℃100u
HCT-8/VCR細胞,耐長春新堿細胞系 人色素瘤細胞,HME6細胞 表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KBD-蘇酸 D-Theronine,≥98% 632-20-2 5G 通用試劑
H4(人) 5×106cells/瓶×2異炳基錄化 ISOPROPYLMcGNqSIUM CHLORIDq 1068-22-9
CD274 Others Human 人 PD-L1 人細胞裂解液 (陽性對照) 碳酸100克
人肝臟星形細胞總RNAHHSteC NA吡羅紅甲基綠Pyronine metxyl green
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。