產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3981 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒直銷 | Melissococcus plutoniusPCR | BKP3981 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
人肺大平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLURIDINE尿苷超級50G58-96-8RT
A375細(xì)胞,人惡性色素瘤細(xì)胞 糞腸球菌 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]同;9,10-二輕-9-氧 cnthronq;9(10H)-cnthrccqnonq;Ccrbothronq;cnthrcnonq 90-44-8
ANGPTL2 Protein Mouse 重組小鼠 ANGPTL2 / Angiopoietin-like 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)OTAC硬脂基基錄化5克色譜用,36~50目
KLE(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-纈酸5克RT,避光
EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴細(xì)胞;B95-8(支鏈淀粉)
HBE(人上皮樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基CM去噻唑基甲基 利托那韋Desthiazolylmethyl Ritonavir質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
腎動脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N-去甲基羅格列酮-d4N-Desmethyl Rosiglitazone-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
RPRD1B Others Human 人 RPRD1B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅格列酮(鉀鹽)Rosiglitazone (potassium salt)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
小鼠腹水瘤細(xì)胞;S-180羅格列酮鹽酸鹽rosiglitazone hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
HPAEC細(xì)胞,人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞 猴腎細(xì)胞系,BSC-1細(xì)胞 CL-0082F9(小鼠)5×106cells/瓶×25-羥基羅格列酮5-Hydroxy Rosiglitazone質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒直銷人口腔角質(zhì)細(xì)胞(HOK)( 5×105 ) NSC,大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 Rattus9-(2-羥丙基-d6)腺嘌呤9-[2-(Hydroxypropyl-d6] Adenine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4(R)-9-(2-羥丙基)腺嘌呤(R)-9-[2-(Hydroxypropyl] Adenine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
FST Others Mouse 小鼠 Follistatin / FST 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-1酸甘油酸激酶3-Phosphoglyceric Phosphokinase質(zhì)量規(guī)格:1000u/mg,Sigma分裝
HPB-ALL(懸浮) T細(xì)胞1,5-二1酸-D-核酮糖/1,5二1酸核酮糖d-ribulose 1,5-diphosphate/RuDP質(zhì)量規(guī)格:90.0%,Sigma
769-P人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 769-P human renal cell carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸性蛋白酶;蛋白酶來自佐氏曲霉Acidic Protease from Aspergillus 質(zhì)量規(guī)格:BR,50u/mg
人脂肪微內(nèi)皮細(xì)胞HAMEC抗壞血酸;維生素C質(zhì)量規(guī)格:AR;>99%Ascorbic acid;vitamin C
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 維生素C(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Ascorbic acid;vitamin C
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO十八胺; 十八烷基胺; 硬脂胺質(zhì)量規(guī)格:AROctadecanamine
NCI-H157細(xì)胞,人非小細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,S-180細(xì)胞 CM-R039大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL山梨酸質(zhì)量規(guī)格:AR,99%Sorbic acid
RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2DL-薄荷醇質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品DL-Menthol