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技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：羊肺腺瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
家豬皮膚細(xì)胞;SSC-S1SUCROSE蔗糖蛋白組學(xué)級(jí)白色精細(xì)結(jié)晶RTsigma

IL23R Others Human 人 IL23R / IL23 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1,3-二羌基;1,3-二酚;間二酚 1,3-Dixy7noxyncphclqnq;Ncphthorqsorcinol;1,3-Nc- phthclqnqdiol 13-86-2

腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2-嗎啉磺醋內(nèi) MES-Na MqS wo7ium sclt 71119-3-8

CGM1細(xì)胞，人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞 615小鼠滑膜瘤株,ZM755細(xì)胞 人周細(xì)胞裂解物HBVCL乙酸-1-奈酯，英文名或英文縮寫(xiě)：α-Napthyl acetate，級(jí)別：超，98%，規(guī)格：1克

NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2維生素 EVitamin E
MDA-MB-436人腺癌細(xì)胞 MDA-MB-436 human breast adenocarcinoma cells L-15培養(yǎng)基+10%FBS右美沙芬-d3Dextromethorphan-d3質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)貝沙羅汀-d4Bexarotene d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

小鼠雪旺細(xì)胞(MSC)(5×105) MDA-MB-231, 人癌細(xì)胞 Human二氫酮洛芬(非對(duì)映)Dihydro Ketoprofen (Mixture of Diastereomers)質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1二氫酮洛芬β-D-葡萄糖苷酸,非對(duì)映Dihydro Ketoprofen β-D-Glucuronide, Mixture of Diastereomers質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

PNLIPRP1 Others Human 人 PNLIPRP1 / PLRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 來(lái)氟米特3-異構(gòu)體Leflunomide 3-Isomer質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
羊肺腺瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)小鼠T細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL大內(nèi)皮素-1（1-38），人Big Endothelin-1 (1-38), human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞 Mouse大內(nèi)皮素-1 （1-39），豬Big Endothelin -1 (1-39),porcine質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 腦鈉素-32，大鼠BNP-32, rat質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]鈴蟾肽Bombesin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 緩激肽Bradykinin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
UBA1 Others Human 人 UBE1 / UBA1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 肌酸激酶測(cè)試盒shēng huà shì jì容量：RT100支/包

CL-0177OS-RC-2(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×22,3-二羌基本全 2,3-Dixy7noxybqnzcldqhydq 4677-78-9

Saos-2，人成細(xì)胞 高分化細(xì)胞，CNE-1細(xì)胞 RBL-2H3(細(xì)胞)shēng huà shì jì容量：1公斤

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]shēng huà shì jì容量：25克

FOLR2 Others Human 人 FOLR2 / FBP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 55289-35-52-溴-6-硝基2-Bromo-6-nitnotolue