產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3899 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
甲型病毒92亞型PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Influenza Virus AH9N2RTPCR | BKP3899 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:甲型病毒92亞型PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
間充質(zhì)干細胞生長添加物MSCGS偶氮錄嶙Ⅳ,英文名或英文縮寫:CPA-Ⅳ,級別:色固,規(guī)格:25克
C2 Others Mouse 小鼠 C2 / Compleme Compone 2 人細胞裂解液 (陽性對照) BOC-L-半胱安醋 BOC-CYS-OH 0887-92-0
人B細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)細胞核堅牢紅,英文名或英文縮寫:Nuclear fast red,級別:色固,規(guī)格:250毫克
大鼠細胞;GH3 膀胱移行細胞癌細胞,T24細胞 MDBK (NBL-1)細胞,牛腎細胞纖維玻璃,英文名或英文縮寫:Glass Fiber,級別:BR,99%,規(guī)格:25克
HNE2, 人細胞系 HumanN-Octyl-b-D-Thioglucopyranoside 1g 原裝 Amresco J575
NCI-H2452 [H2452]人間皮瘤細胞 NCI-H2452 [H2452] human skin tumor cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS暈苯(>95.0%(GC))Coronene質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
PGF Protein Mouse 重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)暈苯(升華提)(>98.0%(GC))Coronene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
馬間葉干細胞(脂肪)(5×105) Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞細胞 Mouse心環(huán)1(>97.0%(GC))Corannulene質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
豬胚胎傳代細胞;ST2,5-二苯基-1,3,4-惡二唑(>98.0%(HPLC))2,5-Diphenyl-1,3,4-oxadiazole質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
RAMP3 Others Human 人 RAMP3 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,5-二(1-萘基)-1,3,4-惡二唑(>98.0%(N)(HPLC))2,5-Di(1-naphthyl)-1,3,4-oxadiazole質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)(HPLC)
甲型病毒92亞型PCR檢測試劑盒供應(yīng)CM-H083人臍動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL膽堿非諾貝特Choline Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Hepa 1-6, 小鼠細胞丙磺舒?;?/span>-D-葡萄糖苷酸Probenecid Acyl β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人癌細胞;MDA-MB-453 人角膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL諾氟沙星-d5Norfloxacin-d5質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人口腔角質(zhì)細胞cDNAHOK cDNA4-含氧諾氟沙星4-Oxo Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-羥基諾氟沙星N-Hydroxy Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格:美國進口
RBE, 人肝細胞6-去氟-6-羥基利培酮質(zhì)量規(guī)格:美國進口6-Desfluoro-6-hydroxy Risperidone
HUVEC, 人臍內(nèi)皮細胞7-羥基利培酮質(zhì)量規(guī)格:美國進口7-Hydroxy Risperidone
人B母細胞;HMy2.CIR 人平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL羥基利托那韋質(zhì)量規(guī)格:美國進口Hydroxy Ritonavir
人正常肝細胞;L-02去噻唑基甲氧基碳酰 利托那韋質(zhì)量規(guī)格:美國進口Desthiazolylmethyloxycarbonyl Ritonavir
DDR1 Others Mouse 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 9'-去甲格拉司瓊(格拉司瓊雜質(zhì)C)質(zhì)量規(guī)格:美國進口9'-Desmethyl Granisetron (Granisetron Impurity C)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。