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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BKP3806 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)RTPCR | BKP3806 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
HA Others H8N4 甲型 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-MANNOSED-甘露糖*
Hep G2, 人細(xì)胞系2-安基本酚 2-cminophqnol 92-22-6
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級500GRT
人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA細(xì)胞色素C1克RT
KP-N-NS細(xì)胞，人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞() 小鼠細(xì)胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細(xì)胞 CL-0397NCI-H23(人非小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×213922-41-31-基硼酸1-Naphthylboronic acid
大鼠肺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL苔酚葡萄糖苷；地衣二醇葡萄糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Orcinol glucosid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品
C6/36細(xì)胞，蚊子細(xì)胞 A-704(人細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A短葶山麥冬皂苷C（標(biāo)準(zhǔn)品）Liriope muscari baily saponins C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD)百兩金素A（標(biāo)準(zhǔn)品）Ardisiacrispin A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
L-O2(人正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 角膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)柳穿魚黃素（標(biāo)準(zhǔn)品）Pectolinarigenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM-prf瓜子金皂苷己（標(biāo)準(zhǔn)品）Polygalasaponin F質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(彝族);HYLD-鹽酸伐昔洛韋D-Valacyclovir Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3 腺癌細(xì)胞，CW-2細(xì)胞 R1610細(xì)胞，中國倉鼠倉鼠肺細(xì)胞伐昔洛韋雜質(zhì)FValacyclovir Impurity F質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
BPH-1, 人細(xì)胞 Human4,5-二氯熒光素(>98%,BR)4,5-Dichlorofluorescein質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
ICOSLG Others Human 人 ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 對乙氧基苯(>98%,BR)4-Ethoxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基SM4-羥基(>98%,BR)4-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Mouse藜蘆醛shēng huà shì jì容量：100克
T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三溴酚 2,4,6-Tribromophqnol 118-79-6
人臍平滑肌細(xì)胞cDNAHUVSMC cDNA西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：2～8℃50毫升
TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甲基-β-環(huán)糊精shēng huà shì jì容量：100克
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化)135-55-72-羥基-7-磺酸鈉wo7ium 2-naphthol-7-sulfonate
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
