產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3242 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書 | African Horse Sickness Virus(AHSV)RTPCR | BKP3242 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol 中文名: 分子式:C29H48O2 度:97.5% 兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit
Dregeoside Da1 中文名: 分子式:C42H70O15 度:% 兔內(nèi)皮素-1(rabbit ET-1) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
Dehydroadynerigenin digitaloside 中文名: 分子式:C30H42O8 度:97.0% 兔纖維蛋白原降解產(chǎn)物(rabbit FDP) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
Cardenolide B-1 中文名: 分子式:C30H44O8 度:98.0% 兔促卵泡素(rabbit FSH) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
Drevogenin A 中文名: 分子式:C28H42O7 度:% 兔堿性成纖維生長因子(rabbit b-FGF/FGF-2) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
Otophylloside O 1326583-08-7 中文名: 分子式:C56H84O20 兔子可溶性內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside 1808159-02-5 中文名: 分子式:C56H84O20 Human cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 人心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4 ELISA試劑盒
Otophylloside F 250217-73-3 中文名:青陽參苷F 分子式:C48H76O16 Humanai-Ku-aibodyELISAKit 人抗Ku抗體(ai-Ku-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside 171422-85-8 中文名: 分子式:C56H90O19 HumanElastaseELISA試劑盒人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 168001-54-5 中文名: 分子式:C56H90O19 組織PDK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書化膽,從牛脂來(>98.0%(T)) Cholesteryl Bromide from Beef Fat 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA檢測試劑盒RatvisfatinELISAKit 96T/48T
膽壬酸酯(>89.0%(GC)) Cholesterol Pelargonate 質(zhì)量規(guī)格:>89.0%(GC) 人白介素13(IL-13)試劑盒 Human Ierleukin 13 ELISA KIT
膽壬基碳酸酯 Cholesterol Nonyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格: 英文名稱MouseFree-T4ELISAKit小鼠游離甲狀腺素(Free-T4)規(guī)格:96T/48T
膽庚基碳酸酯 Cholesterol Heptyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格: PICOGREEN細胞繁殖定量檢測試劑盒50
膽油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC)) Cholesterol Oleyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格:>70.0%(HPLC) Rabbit6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA試劑盒兔6同素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膽甲基碳酸酯(>80.0%(GC)) Cholesterol Methyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格:>80.0%(GC) 小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA 試劑盒
膽乙基碳酸酯(>94.0%(GC)) Cholesterol Ethyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格:>94.0%(GC) Tacrolimus (FK506) ELISA Kit 人他克莫司(FK506)ELISA試劑盒
膽異丙基碳酸酯(>95.0%(GC)) Cholesterol Isopropyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC) HumanHerpessimplexvirus,HSV-Ag1ELISAKit 人單病毒抗原-1(HSV-Ag1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
膽丁基碳酸酯 Cholesterol Butyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格: HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISA試劑盒人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膽異丁基碳酸酯 Cholesterol Isobutyl Carbonate 質(zhì)量規(guī)格: 植物源性食品芥麥(Buckwheat)試劑盒20
DBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并惡二唑] DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格:用于高效液相色譜標記 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA檢測試劑盒Humanoctameranscriptionfactor2A,OTF2AELISAKit 96T/48T
AABD-SH (=4-乙酰氨基-7-巰基-2,1,3-苯并惡二唑](>94.0%(HPLC)) AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole) 質(zhì)量規(guī)格:>94.0%(HPLC) 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)試劑盒 Human octamer anscription factor 2A,OTF2A ELISA Kit
9-(甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T)) 9-(Bromomethyl)acridine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA檢測試劑盒Humanoctameranscriptionfactor2B,OTF2BELISAKit 96T/48T
DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(T)) DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)試劑盒 Human octamer anscription factor 2B,OTF2B ELISA Kit
NBD-COCl [=4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑](>92.0%(T)) NBD-COCl [=4-(N-Chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格:>92.0%(T) 人白喉抗體(Diphtheria Ab)試劑盒 Human Diphtheria aibody ELISA Kit
鄰苯二甲醛(>99.0%(GC)) o-Phthalaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC) 人白介素10(IL-10)試劑盒 Human IL-10 ELISA KIT
丹磺(>95.0%(HPLC)(T)) Dansyl Hydrazine 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T) 人白介素11(IL-11)試劑盒 Human Ierleukin 11 ELISA KIT
DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并惡二唑(>98.0%(HPLC)) DBD-H [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-hydrazino-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC) 人白介素12(IL-12/P40)試劑盒 Human IL-12/P40 ELISA KIT
NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC)) NBD-H (=4-Hydrazino-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole Hydrazine) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC) 人白介素12(IL-12/P70)試劑盒 Human Ierleukin 12,IL-12/P70 ELISA KIT
1,3-環(huán)己二酮(>98.0%(GC)(T)) 1,3-Cyclohexanedione 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 人白介素-12受體(IL-12R)試劑盒 Human Ierleukin 12 receptor,IL-12R ELISA kit
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。