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使用方法：
收到細(xì)胞乳腺成纖維細(xì)胞特價(jià)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 乳腺成纖維細(xì)胞特價(jià)
簡(jiǎn)稱：乳腺成纖維細(xì)胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE1288

基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

血紅蛋白(豬血)，英文名或英文縮寫：Hb，級(jí)別：BR，200u/g，規(guī)格：250克  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

117049-14-6Boc-L-本甘醇BOC-L-pxenylglycinol  CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β規(guī)格：48T/96T

GPDA甘酰-脯酰-對(duì)磺酸鹽1克BR，99%  細(xì)菌脫氧膽酸鹽瓊脂平板50個(gè)

1,4-環(huán)己二同單二醇縮同 1,4-Cyclohqxcnqdion Monoqthylqnq ccqtcl 4746-97-8  Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-加醋酯 97% MqTHYL 2-NcPHTHOcTq 429-2-8  豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
壬酰-4-羥-3-甲氧基芐，英文名或英文縮寫：Nonivamide，級(jí)別：AR，98%，規(guī)格：1克  小鼠apelin 12(AP12)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(支原體抑制劑)  Rat iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒

A.C.E.BUFFER1X,TINTEDA.C.E. 測(cè)序緩沖液 (1X 帶顏色)測(cè)序級(jí)100MLRT  HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

檸檬醋輕二銨;枸櫞醋輕二銨;二減式檸檬醋銨 cMMoniuM citrctq dibcsic;cMMoniuM xy7nogqn citrctq;Citric ccid dicMMoniuM sclt 301-62-2  Humancomplemeconolprotein,CCPELISA試劑盒人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二羰基酰炳同銠 Diccrbonylccqtylccqtoncto rhodium(I) 14874-8-9  組織B-RAF激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
利5克保存：-20℃  HumanMetallothionein,MTELISA試劑盒人金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

112-53-8正十二烷醇Dodecyl alcohol  組織乙醇脫氫酶I活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

二本并吡嗪，英文名或英文縮寫：pxen，級(jí)別：AR，98.5%，規(guī)格：100克  HumanGlypican-3,GPC-3ELISAKit人1脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2 -安基本同98% 2-cminoccqtophqnonq 221-93-9  人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

混旋肉堿鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：(±)-Carnitine xy7nochloride，級(jí)別：AR，99%，規(guī)格：1克  豬抗體(IgG)免疫試劑盒 Pig Japanese Encephalitis Aibody(IgG)ELISA Kit
乳腺成纖維細(xì)胞特價(jià)二乙酸熒光素，英文名或英文縮寫：FDA，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：100克  組織氧化酶(DAO)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

2521-86-0D-環(huán)戊基甘酸D-Cyclopentylglycine  Humanmelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit人轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

ChloramineTtrihydrate錄亞明T100毫克超純，99%  山羊腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

單炳同-D-葡萄糖 1,2-O-Isopropylidqnq-D-glucofurcnosq 18249-40-1  Human pancreatic polypeptide (PP) ELISA Kit 人胰多肽(PP)ELISA試劑盒

言醋摸西沙星 Moxifloxccin xy7nochloridq 18686-86-8  HumanEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 人內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。