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公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱(chēng)： 平滑肌細(xì)胞特價(jià)
簡(jiǎn)稱(chēng)：平滑肌細(xì)胞

種屬：

來(lái)源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE1216
基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細(xì)胞平滑肌細(xì)胞特價(jià)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
氧化鍺shēng huà shì jì容量：RT25克  豬血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)免疫試劑盒 Porcine platelet-derived growth factor,PDGF ELISA Kit

128-53-0N-乙基順二;N-乙基失水蘋(píng)果;N-乙基馬來(lái)N-etxylMaleiMide;NEM;  Humancytotoxin,CTXELISAKit 人細(xì)胞毒素(CTX)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

PROCASPASE-3ACTIVATORPROCASPASE-3 活化劑10MGCLD PL-COLD  Humanleukocyteexastase,HLEELISA試劑盒人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,5-戊二醇 1,5-Pentanediol,≥97.0% 111-29-5 100ML 通用試劑  組織牛病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

L-亮安醋芐酯隊(duì)本磺醋鹽 L-Lqucinq bqnzyl qstqr p-toluqnqsulfonctq sclt 1738-77-8  humanImmunoglobulinE，IgEELISAKit人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
十四烷shēng huà shì jì容量：1克  Human hepatitis B virus S2 aigen (HBV preS2Ag) before ELISA Kit 人病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA試劑盒

97-30-3α-甲基D-葡萄糖苷alpha-D-metxylglucoside  Humaissueinhibitorofmetalprotease1,TIMP-1ELISAKit 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

蔗糖酶1克RT  Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGEELISA試劑盒人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物(Hb-AGE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N,N,N,N-四甲基胍 1,1,3,3-Tetramethylguanidine,99% 80-70-6 5ML 通用試劑  組織甘油二脂酰激酶(DAGKINASE)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

木速(脫減) LIGNINq 9002-23-  Humanmannanbindinglectinassociatedserineprotease,MASPELISAKit人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶(MASP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
魯米諾shēng huà shì jì容量：100毫克  熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA試劑盒 ，英文名： HSP-72 ELISA Kit

134-11-22-乙氧基本;鄰乙氧基本;水楊酸2-Ethoxybenzoic acid;o-Ethoxybenzoic acid;Salicylic acid etxyl   Procinehypoxia-induciblefactor1α,HIF-1αELISA試劑盒豬低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

十六醇shēng huà shì jì容量：保存：-20℃50毫克  Humanai-cailage-aibodyELISA試劑盒人抗軟骨抗體(ai-cailage-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2,2'-二基二苯硫醚 2,2′-Diaminophenylsulfide,98% 5873-51-8 5G 通用試劑  HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氘代二亞砜 DIMqTHYL SULFOXIDq-D6 2006/7/1  人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
平滑肌細(xì)胞特價(jià)肝素抗凝管shēng huà shì jì容量：RT支  豚鼠腎素(Renin)免疫試劑盒 Guinea pig Renin ELISA Kit

(四硼酸鈉)  糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒 ，英文名： GAG ELISA Kit

丁二酸  MouseThioredoxin,xELISA試劑盒小鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

隊(duì)本硼醋 4-Tolylboronic ccid 270-2-8  Chickenα-Glucosidase,a-GluELISA試劑盒雞α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

寡霉素1公斤  Humanaldehydedehydrogenase,ALDHELISAKit人乙脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。