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產品簡稱：U251 MG/TMZ
產品名稱：人類星形耐替莫唑胺細胞

規(guī)格：1×10E6T25/管

種屬：Human

貨號：CE035

帛科細胞工廠適用于工業(yè)批量 ，如疫苗，單克隆抗體或者制藥工業(yè)，也適用于實驗室操作和大規(guī)模細胞培養(yǎng)。方便實用，有效避免污染。

細胞的凍存：
1.先將凍存管放入4℃冰箱，約40min。
2.接著置于-20℃冰箱，約30-60min。
3.置于-80超低溫冰箱中放置過夜。
4.置于液氮罐中長期保存。
5產品僅用于科研同時做好凍存記錄，在自己的筆記本和凍存記錄本上均要記錄。
注意事項：
1.使用DMSO前，不需要進行高壓滅菌，它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破華它的分子結構，以至于降低冷凍保護效果。在常溫下，DMSO對人體有害，故在配制時*戴上手套操作。
2.不宜將凍存細胞放置在0℃～-60℃這一溫度范圍內過久，低溫損傷主要發(fā)生在這一溫度區(qū)內，是“危險溫區(qū)”。
3.注意定期檢查液氮罐內液氮量，及時添加。

具體步驟：
U251 MG/TMZ一. 水的制備：
帛科細胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水
二.PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：
1.溶解定容：將藥品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO40. 2g ）倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至1000ml，搖勻即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶內待消毒：將PBS倒入溶液瓶（大的吊針瓶）內，蓋上膠帽，并插上針頭放入高壓鍋內8磅消毒20分鐘。注意高壓消毒后要用滅菌蒸餾水補充蒸發(fā)掉的水份。
三. 胰蛋白酶溶液的配制與消毒：
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為8.0、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為0.25％，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置于4℃內過夜。
2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器（0.22微米微孔濾膜）抽濾除菌。然后分裝成小瓶于-20℃保存以備使用。

細胞計數：
1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。
2.制備計數用的細胞懸液：用吸管吸5滴細胞懸液到一離心管中，加入5滴臺盼藍染液（0.4％）或苯胺黑，活細胞不會被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細胞和死細胞。
3.將細胞懸液滴入計數板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統計四個大格的細胞數：將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數板，當看到鏡中出現計數方格后，數出四角的四個大鉻（每個大格含有16個中鉻）中沒有被染液染上色的細胞數目。
5.計算原細胞懸液的細胞數:按照下面公式計算細胞密度：
（細胞懸液的細胞數）/ml＝ （ 四個大格子細胞數/4) ×2×104
說明：公式中除以4因為計數了4個大格的細胞數。
公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1：1稀釋。
公式中乘以104因為計數板中每一個大格的體積為：
1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3

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