人Tamm-Horsfall蛋白ELISA試劑盒操作流程如下:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
纖維二糖多粘菌素E(CC)瓊脂基礎(chǔ)凍干配套試劑
改良纖維二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)瓊脂基礎(chǔ) 凍干配套試劑
多粘菌素B(氯化鈉多粘菌素B肉湯凍干配套試劑)
亞碲酸鉀(慶大霉素瓊脂凍干配套試劑)
亞碲酸鉀(四號瓊脂凍干配套試劑)
改良纖維二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)瓊脂基礎(chǔ)
3%氯化鈉三糖鐵瓊脂
Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基(不含瓊脂)
Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基
氯化鈉多粘菌素B肉湯基礎(chǔ)
60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW)
慶大霉素瓊脂
3%氯化鈉溶液
我妻氏血瓊脂
3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂
堿性瓊脂
四號瓊脂
TCBS瓊脂
緩沖-甘油氯化鈉溶液
3%氯化鈉堿性蛋白胨水
堿性蛋白胨水
SCDLP液體培養(yǎng)基
營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)
含鐵牛奶培養(yǎng)基
亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)(SPS)